[发明专利]一种新型CRISPR核酸检测方法及应用

权利要求书

1.一种新型CRISPR核酸检测方法，其特征在于，包括：

与待检测靶标序列互补的crRNA，tracrRNA，Cas14酶，酶缓冲液；或与待检测靶标序列互补的crRNA和tracrRNA连接而成的sgRNA，Cas14酶，酶缓冲液组成的反应体系，在加入待检测核酸后，通过酶切反应，产生可检测的信号变化。

2.一种新型CRISPR核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，制备反应体系；

反应体系包括：与待检测靶标序列互补的crRNA，tracrRNA，Cas14酶，探针，酶缓冲液；或反应体系包括：由crRNA和tracrRNA连接而成的sgRNA，Cas14酶，探针，酶缓冲液；

步骤二，将待检测核酸加入核糖蛋白复合体溶液中；

步骤三，酶切反应，信号的检测和结果的判读。

3.根据权利要求1或2所述的一种新型CRISPR核酸检测方法，其特征在于，所述Cas14酶包括：Cas14a，Cas14b，Cas14c，或者于Cas14旁路切割活性类似的Cas蛋白。

4.根据权利要求1或2所述的一种新型CRISPR核酸检测方法，其特征在于，所述待检测核酸为直接检测样本中的核酸或者检测经扩增后的核酸。

5.根据权利要求1或2所述的一种新型CRISPR核酸检测方法，其特征在于，所述待检测核酸包括：RNA、单链DNA或者双链DNA。

6.一种新型CRISPR核酸检测方法的应用，其特征在于，应用于直接检测核酸的步骤包括：

配制反应体系，所述反应体系包括：tracrRNA，crRNA，Cas14酶，探针，酶缓冲液；所述crRNA与待检测靶标序列互补；

将待测核酸加入反应体系，

将反应体系置于25-95℃，5-200min。

读取信号。

7.一种新型CRISPR核酸检测方法的应用，其特征在于，应用于与恒温扩增结合的一步法核酸检测的步骤包括：

配制反应体系，该体系包括恒温扩增反应体系、Cas14酶、探针、tracrRNA和crRNA；将待测核酸加入反应体系中，并于25-95℃进行扩增及酶切5-200min；所述crRNA与待检测靶标序列互补；

读取信号。

8.一种新型CRISPR核酸检测方法的应用，其特征在于，应用于与扩增技术结合的两步法核酸检测的步骤包括：

配制恒温扩增反应体系或者PCR反应体系；将待测核酸加入扩增反应体系中，并于25-99℃进行扩增5-240min；

配置Cas14a酶切反应体系，将配制的酶切反应体系至于25-95℃温浴1-60min；所述Cas14a酶切反应体系包括：Cas14酶、探针、tracrRNA和crRNA，酶缓冲液；

将扩增产物加入酶切反应体系中，扩增产物和酶切反应体系的体积比为0.0001/1-5/1；

将反应体系置于25-95℃温浴1-60min；

读取信号。

9.一种新型CRISPR核酸检测方法的应用，其特征在于，应用于检测单链DNA的步骤包括：

配制反应体系，所述反应体系包括：tracrRNA，crRNA，Cas14酶，探针，酶缓冲液；所述crRNA与待检测靶标序列互补；

将待测核酸加入反应体系；

将反应体系置于25-95℃，5-200min；

读取信号。