[发明专利]靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统、重组乳酸菌疫苗及制备方法与应用

权利要求书

1.一种靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统，其特征在于，所述重组乳酸菌表面展示系统包括含有核心组件SAM的乳酸菌质粒plSAM；核心组件SAM由信号肽SPusp45、前导肽Ps、N-乙酰胞壁质酶C末端肽聚糖结合区cA、多克隆位点MCS和M细胞杂合肽Mtp组成；所述核心组件SAM的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述核心组件SAM^E的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.如权利要求1所述的靶向M细胞的重组乳酸菌表面展示系统在制备重组乳酸菌疫苗中的应用。

3. 一种重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE，其特征在于，重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE包括将重组抗原SAM-FAdE展示在表面的乳酸菌；所述重组抗原SAM-FAdE包括核心组件SAM和幽门螺旋杆菌黏附因子多表位肽FAdE; 所述幽门螺旋杆菌黏附因子多表位肽FAdE的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；编码所述幽门螺旋杆菌黏附因子多表位肽FAdE的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示; 重组抗原SAM-FAdE的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述重组抗原SAM-FAdE的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.如权利要求3所述的重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE在制备防治幽门螺旋杆菌感染引起的疾病的药物中的应用。

5.如权利要求3所述的重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

将如序列SEQ ID NO.2所示的核心组件SAM基因片段通过酶切和连接，克隆到pNZ8148载体上，得到乳酸菌质粒plSAM；

将如序列SEQ ID NO.4所示的幽门螺旋杆菌黏附因子多表位肽FAdE基因片段和所述乳酸菌质粒plSAM双酶切，回收线性化片段，将FAdE基因片段和乳酸菌质粒plSAM线性化片段连接，得到重组载体plSAM-FAdE；

将所述plSAM-FAdE重组载体转化进宿主细胞，通过培养和诱导剂诱导表达，得到重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE。

6.根据权利要求5所述重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE的制备方法，其特征在于，所述表达宿主细胞为乳酸球菌NZ9000菌株。

7.根据权利要求5所述重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-FAdE的制备方法，其特征在于，所述诱导剂为Nisin诱导剂，所述Nisin诱导剂的终浓度为1ng/mL。