[发明专利]血小板抗人球蛋白实验免疫区带分布检测方法

说明书

本发明公开了一种血小板抗人球蛋白实验免疫区带分布检测方法，其采用免疫标记抗人球蛋白实验，通过免疫标记物包括但不限于放射性同位素、胶体金、荧光素、量子点、化学(或生物)发光剂指示或有机染料等标记抗人球蛋白试剂，然后与血小板特异性抗体反应结合，并通过离心进入区带分布检测卡中，呈现不同的区带分布，从而判定检测结果。本发明方法操作简单、结果直观可靠、成本低廉而结果准确，可满足临床常规血小板抗体检测的需求，辅助临床血小板相关免疫性疾病的诊断，以及进行输血前相容性实验检测，减少血小板输注无效症的发生及其引起的出血及死亡病例，保障临床安全、有效、科学的血小板输血，同时还可节约宝贵的血小板资源。

技术领域

本发明涉及免疫学和医学检验领域，特别涉及一种血小板抗人球蛋白实验免疫区带分布检测方法。

背景技术

血小板表面具有复杂的血型抗原，包括ABO抗原、HLA-I抗原及血小板特异性HPA抗原、CD36抗原，这些抗原均可以刺激机体产生血小板抗体。血小板抗体可引起患者发生血小板免疫损伤，产生免疫性血小板减少，如血小板输注无效、输血后紫癜、自身免疫性血小板减少症，以及新生儿血小板减少症等。特别是抗血小板CD36特异性抗体，在我国临床血小板免疫性疾病的发生过程中具有重要意义。

血小板输血是目前血小板减少症和多种疾病的最主要治疗手段之一。大量研究结果表明，患者输注血小板前进行抗体检测和交叉配型以筛选相容性的血小板进行输注，输血有效率大于70％，而仅ABO血型相同的随机输注血小板有效率低于30％。这不仅仅浪费了宝贵的血液资源，而且不相容血小板使患者体内生成血小板抗体，导致免疫反应，造成输血无效，患者也几乎无例外地病情加重，特别是对于长期依赖血小板输注的血液病患者，往往导致体内产生高效价的血小板抗体，出血症状得不到改善乃至病情加重。

要准确、高效率、及时地诊断血小板相关免疫性疾病和输血治疗，理论上都必须进行血小板抗体检测和交叉配血。目前国际上血小板抗体分析的金标准方法“单克隆抗体固着血小板抗原分析技术(The monoclonal antibody immobilization of plateletantigen assay,MAIPA)”实验程序繁杂，操作时间长至5小时以上，同时对实验操作人员技术要求高，不能应用于临床常规检测应用。

抗人球蛋白实验是检测红细胞血型不完全抗体的经典方法，但未能有效应用于血小板抗体检测，主要原因在于红细胞呈现肉眼可见红色，形态规则，大小较均匀，凝集与非凝集易于判定。而血小板本身无颜色，形态不规则，大小分布不均匀，并且容易被激活聚集，难以通过凝集方法检测抗体。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种血小板抗人球蛋白实验免疫区带分布检测方法，该方法将经典的抗人球蛋白实验技术和创新的免疫标记区带分布技术相结合，操作简便、准确性高。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种血小板抗人球蛋白实验免疫区带分布检测方法，包括以下步骤：

1)制备抗人球蛋白，并采用免疫标记物标记得到免疫标记抗人球蛋白；

2)制备血小板悬液；

3)预先在区带分布检测卡的反应腔中加入免疫复合物分离增强介质，以在所述区带分布检测卡的分离柱中形成免疫复合物分离增强介质区域；

4)将待测样品与所述步骤2)制得的血小板悬液进行孵育反应，分离后将得到的反应产物与所述步骤1)制得的免疫标记抗人球蛋白加入所述步骤3)获得的区带分布检测卡的反应腔中反应，离心；

5)观察所述区带分布检测卡的检测窗，判定检测结果；

其中，血小板与待测样品孵育、分离后在所述区带分布检测卡的反应腔内与免疫标记抗人球蛋白反应，反应产物通过离心进入所述免疫复合物分离增强介质区域并呈现不同的区带分布：