[发明专利]一种具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽及其制备方法

权利要求书

1.一种具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

羊皮的前处理：将脱毛羊皮物理脱脂后洗净、剪成1×1cm的羊皮粒，然后进行脱灰、脱脂及除杂蛋白处理，处理完毕后对羊皮粒进行再次清洗；

羊皮胶原蛋白的提取：将经过前处理所得羊皮粒采用碱溶液浸泡，浸泡后收集羊皮粒进行脱钙、双氧水处理，羊皮粒清水冲洗后进行热解处理，所得溶液即为羊皮胶原蛋白溶液；

胶原蛋白的酶水解：在得到的羊皮胶原蛋白溶液中加入Alcalase碱性蛋白酶、中性蛋白酶或风味蛋白酶进行水解，水解完毕后高温灭酶，收集上清液备用；

胶原蛋白肽的制备：将酶解处理后的羊皮胶原蛋白肽上清液澄清处理，对酶解液进行DPP-IV抑制活性检测，浓缩溶液后冷冻干燥，即为具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽；

所述羊皮胶原蛋白肽的氨基酸序列为Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Gly-Pro-Val。

2.根据权利要求1所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述羊皮的前处理中包括如下步骤：

原料羊皮浸水清洗：将脱毛羊皮用清水冲洗至皮料水中无砂土，浸泡，并在浸泡的过程中保持换水，剪除多余脂肪，然后在搅拌的条件下清洗，并在清洗的过程中保持换水，

浸泡脱灰：将清洗后的羊皮加入硫酸铵溶液，常温下搅拌浸泡并保持换溶液，脱灰后使用去离子水冲洗并调节pH至7.5；

除杂蛋白：将脱灰后的羊皮加入到食盐水中，常温下搅拌浸泡并更换一次溶液，浸泡后用水洗涤干净；

二次脱灰：浸泡后将水洗涤干净的羊皮粒皮块加入到纯碱溶液中浸泡并搅动，最后沥水、水洗3次；

脱脂：将洗净的羊皮粒与乙醇混合，浸泡脱脂后过滤除去乙醇，用蒸馏水清洗羊皮粒后，再将羊皮粒加入到NaCl溶液中，浸泡24h后过滤，所得羊皮粒用蒸馏水清洗后备用。

3.根据权利要求1所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备 方法，其特征在于：所述羊皮胶原蛋白的提取中包括如下步骤：

碱液浸泡：取脱脂后的羊皮粒加入到氢氧化钠溶液室温浸泡，每天搅拌3次，每天换一次相同浓度和体积的碱液；

脱钙处理：使用硫酸钠溶液浸泡碱处理后羊皮粒，室温放置24h，室温下，去离子水冲洗羊皮粒至溶液pH为7.5；

双氧水处理：脱钙后的羊皮粒浸入双氧水溶液中，浸泡24h，隔一段时间后更换双氧水溶液，随后，羊皮粒用水清洗干净；

热解处理：清洗干净后的羊皮粒浸入水中，进行煮胶，升高温度保持一段时间。

4.根据权利要求1所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述胶原蛋白的酶水解中包括如下步骤：

调节pH和温度至后续加入的蛋白酶的最适pH和温度，加入蛋白酶，酶解足够时间，将酶解后得到的酶解液升温进行灭酶。

5.根据权利要求1所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述胶原蛋白肽的制备中包括如下步骤：

澄清过滤：以硅藻土或活性炭为吸附剂，使用砂芯漏斗抽滤，滤液使用离心机在高转速下离心，去上层油脂和下层沉淀，得澄清溶液；

浓缩干燥：将澄清后溶液旋转蒸发，体积浓缩一半以上；浓缩液经冷冻干燥后得胶原蛋白肽。

6.根据权利要求4所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述酶水解中蛋白酶的用量为7200～16000U。

7.根据权利要求4、6中任一所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述酶水解中蛋白酶为Alcalase碱性蛋白酶，所述蛋白酶的用量为9600U。

8.根据权利要求3所述的具有DPP-IV抑制活性的羊皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述碱液浸泡中碱的浓度为0.5mol/L。