[发明专利]一种新型的血清甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种甲胎蛋白异质体3（AFP‑L3）测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：哌嗪‑1,4‑二乙磺酸(PIPES)缓冲液、NaCl、表面活性剂、助悬剂、防腐剂。试剂R2：哌嗪‑1,4‑二乙磺酸(PIPES)缓冲液、羊抗人AFP‑L3抗体包被胶乳颗粒、羊抗人AFP‑L3抗体包被磁性纳米颗粒、助悬剂、稳定剂、防腐剂。本发明同时提供了该试剂盒的制备方法和应用，该试剂盒可以有效替代化学发光免疫分析仪试剂盒，是一种新型稳定性强，灵敏度高，重复性好，成本低的液体试剂盒，便于项目在临床的开展和应用。

技术领域

本发明涉及生化试剂测定技术领域，特别涉及一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，还涉及所述甲胎蛋白异质体3测定试剂盒制备方法和应用。

背景技术

原发性肝细胞癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一，死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃癌、食道癌而居第三位。我国是乙肝大国，大约有1.2亿例乙肝病毒携带者，每年有13万患者死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的45%。与其他肿瘤普查一样，肝癌防治主要在于“三早”，即早期发现、早期诊断和早期治疗。早期肝癌，如得到科学治疗，5年生存率在50-70％以上，不少患者可以长期存活。中晚期肝癌通常伴有肝内外的转移，手术无法切除，药物治疗也难有显效，手术并发症多，疗效差，生存期短，一般发病后生存时间仅为6个月。临床肝癌治疗困难的最主要原因是临床确诊时已近晚期。因此对于肝癌，在亚临床阶段即可得出诊断非常重要。甲胎蛋白(AFP)已经被广泛应用于临床诊断，但是HCC和肝病患者血清中AFP均有升高，致使对AFP检测结果的解释产生混淆。从临床经验角度观察，AFP特异性不足限制了HCC早期诊断的价值。其中AFP的异质体AFP-L3是肝癌细胞所特有，可以作为检测HCC的一个新的肿瘤标志物。

AFP-L3临床意义：

（1）AFP-L3有助于鉴别AFP阳性的良、恶性肝病：甲胎蛋白异质体AFP-L3只由肝癌细胞分泌产生，因此检测甲胎蛋白异质体比率，可有效鉴别良、恶性肝病。

（2）AFP-L3有助于预警肝癌发生：在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位病变时，相比较影像学技术，AFP-L3可以提前9-12个月被检测出，FDA报道有21个月预警的，对患者进行AFP-L3检测可以早期预警肝癌发生。如果患者血清中AFP-L3占AFP比例超过10%，即可定为阳性，提示肝癌的发生率大于95%。AFP-L3占总AFP的比例越高提示肿瘤的恶性程度越高。

目前检测甲胎蛋白异质体3的方法主要是双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)，该方法准确性和灵敏度高，但是仪器设备昂贵，试剂保存不方便，价格高。胶乳免疫比浊法法具有特异性高，操作简单快捷、准确安全、可自动化分析、成本较低的优点，但现在国内并没有出现AFP-L3生化试剂盒，仅有AFP试剂盒。AFP-L3生化试剂盒研发困难，样本中含量低，反应不灵敏，本发明针对甲胎蛋白异质体3试进行剂盒的研发以满足临床检测以及化学分析的要求。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强，灵敏度高，重复性好，成本低的液体试剂盒。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种甲胎蛋白异质体3测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；

试剂R1中含有以下成分：

缓冲液 20-80mmol/L；

NaCl 9g/L；

助悬剂 10-40g/L；

表面活性剂 0.1%-2%；