[发明专利]2019新型冠状病毒N基因检测的引物组、恒温荧光检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其特征在于，其包括1#外引物F3、1#外引物B3、1#内引物FIP、1#内引物BIP、1#环引物LF和1#环引物LB，其中，1#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述1#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述1#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述1#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示；所述1#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述1#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其特征在于，其包括1#外引物F3、1#外引物B3、1#内引物FIP、1#内引物BIP、1#环引物LF和1#环引物LB，其中，1#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述1#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述1#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述1#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示；所述1#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述1#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，其还包括权利要求2所述的引物组。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的引物组在制备用于检测2019新型冠状病毒N基因的试剂盒中的应用。

5.一种2019新型冠状病毒N基因检测的恒温荧光检测试剂盒，该试剂盒包括：如权利要求1-3中任一项所述的引物组。

6.根据权利要求5所述的恒温荧光检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括链置换Bst DNA聚合酶、逆转录酶、dNTPs、SYTO-9、Tris-HCl、betaine、KCl和MgCl₂。

7.根据权利要求5所述的恒温荧光检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为N基因体外转录RNA序列的质粒作为阳性对照，所述阴性对照为去核酸的灭菌水。

8.一种对2019新型冠状病毒N基因检测的方法，其特征在于，该方法是非诊断目的的检测方法，具体包括以下步骤：

(1)从样品中提取RNA；

(2)对步骤(1)提取的所述RNA进行等温扩增；其中，在反应体系中，采用如权利要求1-3中任一项所述的2019新型冠状病毒N基因检测的引物组；

(3)荧光定量PCR仪设定：63℃，15s；63℃，45s，采集信号，共45个循环；

(4)结果判定：若有“S”型扩增曲线，则判断为阳性，若无“S”型扩增曲线，则判断为阴性。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述等温扩增的反应体系，具体如下：反应总体积为25μL，其中，

所述反应体系中含有N-1:反应液：8×10⁵U/L Rnasin，200mM dNTPs，10mM Tris-HCl，20mM KCl，3.5mM MgCl₂，0.8M betaine，3.2Μm的各内引物，0.4μM各外引物，1.6μM各环引物，SYTO-9总共22μL，Bst聚合酶0.8μL，AMV酶0.2μL，样品RNA模板2.0μL。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，同时设置无核酸酶水为阴性对照；采用含N基因体外转录RNA的序列质粒作为阳性对照进行检测。