[发明专利]一种诊断试剂用重组蛋白的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种诊断试剂用重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述的方法包括：

步骤1，将CRP蛋白编码基因克隆至pAO815Gα载体中构建单拷贝重组质粒；

步骤2，利用步骤1获得的单拷贝重组质粒获得四拷贝重组质粒；

步骤3，将步骤2所得四拷贝重组质粒进行线性化处理，获得线性化重组质粒；

步骤4，将步骤3获得的线性化重组质粒转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中；

步骤5，从步骤4获得的体系中挑取单克隆转化子，培养所述单克隆转化子自诱导表达CRP蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种诊断试剂用重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述CPR编码基因包括如下(1’)至(3’)中的至少一种：

(1’)如SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(2’)在严格条件下与(1’)所示DNA分子杂交，并且编码CRP蛋白的DNA分子，其中，所述CRP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或者，所述CRP蛋白为将SEQ ID No.1所示的蛋白经过一个或者几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加并且具有相同功能的蛋白；

(3’)与(1’)或者(2’)所述DNA分子具有90％以上同一性，并且编码所述CRP蛋白的DNA分子。

3.根据权利要求1所述的一种诊断试剂用重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述pAO815Gα载体由pAO815载体与GAP启动子及α-factor分泌信号肽基因构建而成。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤5之后，所述方法还包括：使用ECH填料柱对CRP蛋白进行纯化。

5.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括由权利要求1-4任一权利要求所述的制备方法所得到的CRP蛋白。

6.权利要求1-4任一权利要求所述制备方法得到CRP蛋白用于制备CRP蛋白标准品的应用。