[发明专利]从生物材料中分离纯化核酸固体的方法

说明书

本发明公开了从生物材料中分离纯化核酸固体的方法，步骤：(1)，将含有裸露核酸的液体与沉淀剂混合；在室温下，离心，将上清液倒入新离心管中；(2)向新离心管中加入异丙醇，混匀，在室温下，静置，离心，有白色沉淀生成，弃去白色沉淀以外的其它；洗涤，得到RNA固体，或RNA与DNA的混合固体，保存；本发明用匀浆解离剂匀浆生物材料，不需要加热就可以简单获得含有裸露核酸的液体，用于提取RNA固体和DNA固体；匀浆解离剂中添加去除细胞次生代谢物的化合物，可提取藤本RNA、木本RNA、人血液中的RNA固体和DNA固体；本发明获得的核酸固体(特别是RNA固体)可在室温保存一个月、在‑20℃以下可保存一年。

技术领域

本发明涉及从生物材料(包括动物器官、动物组织、动物细胞、植物器官、植物组织、植物细胞、真菌或细菌等)中提取出来RNA固体或(和)DNA固体的方法。

背景技术

核酸提取是包括农林牧渔医药等生命领域的基本技术，将从动植物和微生物细胞中提取的核酸用于各种检测，例如从人的鼻腔补，咽喉部的细胞提取RNA，用于新冠病毒的检测，用于确诊新冠病毒感染患者。我们以前的被授权专利(美国专利US 9，382，576，日本专利特许第5824747号，中国专利ZL 2011101292535和PCT/CN2012/071598))曾提到了通用的各种核酸提取的方法，特别是RNA提取方法的不足，这里就不再重复。

我们以前的专利(中国专利ZL 2011101292535)也存在一些不足：1、常常需要加热；2、只能提取RNA，不能提取DNA；3、不能提取藤本和木本RNA的缺陷；4、不能提取血液中的DNA和RNA。为了克服这些问题，我们对原有的核酸提取方法进行了改进，以适应生命领域的应用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供从生物材料中分离纯化核酸固体的方法。

本发明的技术方案概述如下：

从生物材料中分离纯化核酸固体的方法,包括如下步骤：

(1)按体积比为1：(1～11)的比例，将含有裸露核酸的液体与起沉淀作用的3.64M-5M的碱金属盐水溶液混合；在室温下，离心，将上清液倒入新离心管中；

(2)下述三种方式之一进行：

方式一：

按体积比为(1～4.4)：1的比例，向步骤(1)获得的装有上清液的新离心管中加入异丙醇，混匀，在室温下，静置1-30min，离心，有白色沉淀生成，弃去白色沉淀以外的其它；洗涤，得到RNA固体，或RNA与DNA的混合固体，保存；

方式二：

按体积比为(1～4.4)：1的比例，向步骤(1)获得的装有上清液的新离心管中加入异丙醇，混匀；在室温下，静置1-30min，再加入相当于所述上清液体积(0.0714-0.1348)倍的蒸馏水，混匀，离心，有白色沉淀生成，弃去白色沉淀以外的其它；洗涤，得到DNA固体，或DNA与RNA的混合固体，保存；

方式三：

1)按体积比为(1.5～1.76)：1的比例，向步骤(1)获得的装有上清液的新离心管中加入异丙醇，混匀，在室温下，静置1-30min，离心，有白色沉淀生成，将除白色沉淀以外的、命名为保留液的液体倒入另一个新离心管中；洗涤白色沉淀，得到RNA固体，或RNA与DNA的混合固体，保存；

2)向装有保留液的新离心管中加入蒸馏水，混匀；在室温下，离心1～30min，有白色沉淀生成；弃去白色沉淀以外的其它，洗涤；得到DNA固体，保存；所述上清液与蒸馏水的比为1：(0.125-0.1705)。

所述含有裸露核酸的液体用下述方法制备：

按比例，将16.27-162.8mg的生物材料与1ml匀浆解离剂进行匀浆，得到含有裸露核酸的液体；