[发明专利]一种NK/T淋巴瘤小鼠模型的建立方法

说明书

本发明属医学实验技术领域，涉及肿瘤实验动物模型的构建，具体涉及利用NK/T淋巴瘤细胞系构建免疫缺陷小鼠模型的方法。本发明用可稳定表达人白介素2的NK/T淋巴瘤细胞系构建动物模型，利用高浓度基质胶的支持作用和促进生长作用，使肿瘤细胞在免疫缺陷小鼠肾包膜下能够固定和生长，成瘤率100％，且成瘤的速度快。该方法克服现有技术中NK/T淋巴瘤细胞系在免疫缺陷小鼠体内的成瘤率低，难以稳定传代以及操作繁琐等的缺陷，能较快地构建NK/T淋巴瘤的稳定小鼠模型，从而为该技术领域的研究奠定应用基础，具有较好的实用价值和推广应用意义。

技术领域

本发明属医学实验技术领域，涉及肿瘤实验动物模型的构建，具体涉及利用NK/T淋巴瘤细胞系构建免疫缺陷小鼠模型的方法。

背景技术

文献记载了鼻型结外NK/T淋巴瘤是一种与EB病毒感染相关的罕见非霍奇金淋巴瘤，主要来源于NK细胞，少量来源于T细胞，亚洲、拉丁美洲发病率高于欧洲和美洲。研究显示，该肿瘤好发于鼻中部，鼻窦区，鼻咽部和腭部等面中部区域，呈侵袭性进展。目前临床针对该疾患常用的放疗和化疗方案的治疗效果尚不理想。NK/T淋巴瘤的发病机制至今未被清晰阐释，也尚未有疗效理想地针对性药物面世，其中缺乏稳定的动物模型是横亘在NK/T淋巴瘤研究领域里的一道难关。

业内知晓，适宜的动物模型的构建是肿瘤发病机制和治疗药物研究的重要一环，实践证实，性状稳定的动物模型能真实反应肿瘤在体内的状态和对各种药物刺激的反应，稳定模型的建立则是肿瘤研究进展的基础之一。通常，肿瘤模型建立方法有：药物诱导，辐射诱发，人源肿瘤组织移植瘤模型和人源肿瘤细胞系移植模型等，前两者因为费时较长，高异质性以及特异性差等缺点较少被采用，采用稳定的肿瘤细胞系或患者来源的肿瘤组织构建免疫缺陷动物荷瘤模型是目前构建荷瘤动物模型的常用方法。

业内若干研究人员尝试通上述两种方法构建NK/T淋巴瘤的模型，但是均不能获得理想的结果。其中，一方面，利用患者肿瘤组织进行荷瘤实验的难点在于合格组织的获取和稳定的传代，某研究组，如华西医院的科学家曾多次尝试采用取自鼻腔的肿瘤组织构建免疫缺陷小鼠模型，但皆因小鼠死于感染而失败。2008年，该研究组利用一例NK/T淋巴瘤病人的胃部复发转移瘤组织进行BALB/c(nu/nu)裸鼠右侧腋下皮下荷瘤实验，造模成功[1]，但后期肿瘤性状开始改变，随着肿瘤传代次数的增加，与原代肿瘤组织相比，混合的炎症细胞数量逐渐减少，肿瘤细胞变大，多态性减少，间质组织的含量也减少，一些抗原的表达变得不稳定，在大约保存80代以后彻底丢失。另一方面，利用细胞系建立小鼠荷瘤模型也存在较多困难，NK/T淋巴瘤细胞系难以成瘤，鲜有成瘤报道。本申请的研究团队曾进行了SNT8，SNK10，SNT16和NK92的荷瘤实验，即使在重度免疫缺陷的NSG小鼠上也均未成功，其原因推测可能是上述细胞均需依赖人白介素-2生存，在小鼠体内因缺乏人白介素-2而无法正常生长。2019年郑州大学第一附属医院的团队利用NKYS细胞系建立NOD/SCID小鼠模型，而成功建模的前提是给小鼠每周腹腔注射一次人白介素2[2]，但是，由于白介素2是一种有效的免疫调节因子，现已用于肿瘤的生物治疗，而全身运用白介素2存在产生多种严重的并发症，如肺水肿、低血压、贫血以及毛细血管渗漏综合征所产生的器官功能异常等的风险，因此，其对荷瘤小鼠的生长状况的影响是不得不考虑的影响因素。

鉴于此，目前尚未见稳定的NK/T细胞淋巴瘤的动物模型可供研究。科学家们所做的多种尝试均存在成功率低，标本难以获取，无法稳定传代保存，操作繁琐等缺点，尚不能满足相关研究的需求。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种NK/T淋巴瘤小鼠模型的建立方法，尤其是利用NK/T淋巴瘤细胞系构建免疫缺陷小鼠模型的方法。

与本申请相关的现有技术有：