[发明专利]一种NK/T淋巴瘤小鼠模型的建立方法

权利要求书

1.一种NK/T淋巴瘤小鼠模型的建立方法，其特征在于，利用高浓度基质胶的支持作用和促进生长作用，建立NK/T淋巴瘤小鼠模型，其包括步骤：

1)准备免疫缺陷小鼠；所述免疫缺陷小鼠为5周龄雌性免疫缺陷小鼠，于SPF环境适应性饲养一周，接种前剃毛及75％酒精消毒处理；

2)细胞系预处理

培养可稳定表达人白介素2的NK/T淋巴瘤细胞系NK92MI，所述细胞系购于ATCC，接种前进行如下处理：

冰上融化高浓度基质胶，-20℃预冷1ml注射器；800rpm离心5min收集生长状态良好的细胞，每只小鼠所需细胞数量为1×10⁶-1×10⁷，用无血清培养液重悬后，再离心收集细胞，弃上清；按照每只小鼠80-100μl基质胶的比例向细胞沉淀中加入高浓度基质胶，混合成混悬液，冰上操作；

3)荷瘤操作，将NK/T淋巴瘤细胞系NK92MI接种于免疫缺陷小鼠建立免疫缺陷小鼠模型；按如下步骤进行荷瘤操作：

将NK/T淋巴瘤细胞系NK92MI接种于免疫缺陷小鼠的皮下或肾包膜，建立免疫缺陷小鼠模型，包括:

(1)小鼠皮下荷瘤

超净工作台去除小鼠被毛，酒精消毒，将步骤2)中处理的细胞沉淀与基质胶的混悬液注射至小鼠皮下；

(2)小鼠肾包膜下注射细胞悬液，小鼠注射1％戊巴比妥钠麻醉后，将步骤2)中处理的细胞沉淀与基质胶的混悬液注射至小鼠肾包膜下，每只小鼠注射80μL混悬液，正常饲养小鼠；

4)观察肿瘤形成情况，注射一周后，建得NK/T淋巴瘤小鼠模型。

2.按权利要求1所述的NK/T淋巴瘤小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述步骤4)中，观察肿瘤形成情况，注射一周后，建得NK/T淋巴瘤小鼠模型；

对制得的NK/T淋巴瘤小鼠模型，进行肿瘤组织和内脏HE染色、免疫组化和原位杂交检测。

3.按权利要求1所述的NK/T淋巴瘤小鼠模型的建立方法，其特征在于，制得的NK/T淋巴瘤小鼠模型稳定表达人白介素2，肿瘤细胞在免疫缺陷小鼠肾包膜下能固定和生长，成瘤率100％，成瘤的速度快。