[发明专利]表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒和制备方法

说明书

本发明公开了表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒及其制备方法，所述重组腺病毒包含猪δ冠状病毒S1基因，所述重组腺病毒感染AD293细胞后能够稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白，制备步骤为：获取猪δ冠状病毒的总RNA；反转录S1基因并进行鉴定；获取S1基因的cDNA模板；设计引物，扩增S1基因并纯化回收；构建pDC315/S1重组质粒；扩增S14获得的pDC315/S1重组质粒；将S15获得的pDC315/S1重组质粒进行病毒包装，获得含有pDC315/S1重组质粒的重组腺病毒，包装成功了重组腺病毒，该重组腺病毒感染AD293细胞后能够大量准确的表达S1蛋白，为疫苗的制备奠定基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒和制备方法。

背景技术

猪δ冠状病毒(Porcineδcoronavirus,PDCoV)是一种新兴冠状病毒,可引发仔猪的呕吐、腹泻、脱水,甚至死亡,给养猪业造成巨大损失。PDCo V主要编码的4个结构蛋白是:纤突蛋白(Spike,S1)、核衣壳蛋(nucleocapsid,N)、膜糖蛋白(membrane,M)、小膜蛋白(envelope,E)，其中，纤突蛋白由S1基因编码，因此纤突蛋白也被称为S1蛋白，S1蛋白具有受体结合位点，并决定病毒的嗜性，能够诱导猪产生中和抗体进行免疫保护的结构蛋白，因此，携带S1基因的重组腺病毒可以用于制作疫苗，激活猪的体液免疫和细胞免疫，针对猪δ冠状病毒的防控具有很大的优势，然而，目前并没有关于携带猪δ冠状病毒S1基因的腺病毒的相关研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的不足，提供表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒和制备方法，包装成功了重组腺病毒，该重组腺病毒感染AD293细胞后能够大量准确的表达S1蛋白，为疫苗的制备奠定基础。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒，所述重组腺病毒包含猪δ冠状病毒S1基因，所述重组腺病毒感染AD293细胞后能够稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白。

进一步的，所述猪δ冠状病毒S1基因的序列如S1EQ ID NO.1所示，所述猪δ冠状病毒S1蛋白的序列如S1EQ ID NO.2所示.

进一步的，包括以下步骤：

S1、获取猪δ冠状病毒的总RNA；

S2、反转录S1基因并进行鉴定；

S3、获取S1基因的cDNA模板；

S4、设计引物，扩增S1基因并纯化回收；

S4、构建pDC315/S1重组质粒；

S5、扩增S4获得的pDC315/S1重组质粒；

S6、将S5获得的pDC315/S1重组质粒进行病毒包装，获得含有pDC315/S1重组质粒的重组腺病毒。

进一步的，步骤S11中，鉴定含有转录S1基因的RNA的步骤包括：

1)设计鉴定引物，所述鉴定引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物为PDCoV-S1-pF1，参见S1EQ ID NO.3，所述下游引物为PDCoV-S1-pR1，参见S1EQ ID NO.4；

2)反转录并扩增总RNA；

3)跑胶，观测目的条带。

进一步的，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物为PDCoV-S1-F，参见SEQ ID NO.5，所述下游引物为PDCoV-S1-R，参见SEQ ID NO.6。

进一步的，还包括：