[发明专利]表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒和制备方法

权利要求书

1.表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒，其特征在于：所述重组腺病毒包含猪δ冠状病毒S1基因，所述重组腺病毒感染AD293细胞后能够稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白。

2.根据权利要求1所述的表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒，其特征在于，所述猪δ冠状病毒S1基因的序列如S1EQ ID NO.1所示，所述猪δ冠状病毒S1蛋白的序列如S1EQ IDNO.2所示.

根据权利要求1或2所述的表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、获取猪δ冠状病毒的总RNA；

S2、反转录S1基因并进行鉴定；

S3、获取S1基因的cDNA模板；

S4、设计引物，扩增S1基因并纯化回收；

S4、构建pDC315/S1重组质粒；

S5、扩增S4获得的pDC315/S1重组质粒；

S6、将S5获得的pDC315/S1重组质粒进行病毒包装，获得含有pDC315/S1重组质粒的重组腺病毒。

3.根据权利要求3所述的表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，步骤S11中，鉴定含有转录S1基因的RNA的步骤包括：

1）设计鉴定引物，所述鉴定引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物为PDCoV-S1-pF1，参见S1EQ ID NO.3，所述下游引物为PDCoV-S1-pR1，参见S1EQ ID NO.4；

2）反转录并扩增总RNA；

3）跑胶，观测目的条带。

4.根据权利要求3所述的表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物为PDCoV-S1-F，参见SEQ ID NO.5，所述下游引物为PDCoV-S1-R，参见SEQ ID NO.6。

5.根据权利要求3所述的表达猪δ冠状病毒S1基因的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，还包括：

S7、将步骤S16获得的重组腺病毒感染AD293细胞，鉴定S1蛋白的表达情况。