[发明专利]SpRYn-ABE碱基编辑系统在植物基因组碱基替换中的应用

权利要求书

1.一种将植物基因组靶点序列中的A突变为G的方法，为如下1)或2)：

所述1)包括如下步骤：将SpRYn、腺嘌呤脱氨酶和sgRNA导入植物体内，实现将植物基因组靶点序列中的A突变为G；

所述2)包括如下步骤：将SpRYn的编码基因、腺嘌呤脱氨酶的编码基因和转录sgRNA的DNA分子导入植物体内，使所述SpRYn、所述腺嘌呤脱氨酶和所述sgRNA均得到表达，实现将植物基因组靶点序列中的A突变为G；

所述sgRNA靶向靶点序列；

所述靶点序列的PAM序列为NAN或NCN或NTN；N为A、T、C或G。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述SpRYn为A1)或A2)或A3)：

A1)氨基酸序列是序列4所示的蛋白质；

A2)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述腺嘌呤脱氨酶为ecTadA和ecTadA*；

所述ecTadA为C1)或C2)或C3)：

C1)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；

C2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

C3)在C1)或C2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述ecTadA*为E1)或E2)或E3)：

E1)氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；

E2)将序列表中序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

E3)在E1)或E2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述sgRNA为esgRNA；

所述esgRNA如式I所示：所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架(式I)；

所述esgRNA骨架为n1)或n2)或n3)：

n1)将序列1第617-702位中的T替换为U得到的RNA分子；

n2)将n1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子；

n3)与n1)或n2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA分子。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述SpRYn的编码基因为b1)或b2)或b3)：

b1)序列表中序列1第4132-8232位所示的cDNA分子或DNA分子；

b2)与b1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1或2中所述SpRYn的cDNA分子或DNA分子；

b3)在严格条件下与b1)或b2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1或2中所述SpRYn的cDNA分子或DNA分子；

所述ecTadA的编码基因为d1)或d2)或d3)：

d1)序列表中序列1第2944-3441位所示的cDNA分子或DNA分子；

d2)与d1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1或3中所述ecTadA的cDNA分子或DNA分子；

d3)在严格条件下与d1)或d2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1或3中所述ecTadA的cDNA分子或DNA分子；

所述ecTadA*的编码基因为f1)或f2)或f3)：

f1)序列表中序列1第3538-4035位所示的cDNA分子或DNA分子；

f2)与f1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1或3中所述ecTadA*的cDNA分子或DNA分子；

f3)在严格条件下与f1)或f2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1或3中所述ecTadA*的cDNA分子或DNA分子。

6.权利要求1-5任一所述方法在植物基因组碱基替换中的应用。