[发明专利]高密度细胞存储方法

权利要求书

1.一种用于产生高密度冷冻细胞库的非离心方法，所述方法包括：

a)在灌注生物反应器中培养细胞，其中搅拌所述生物反应器以进行有效的混合和气体交换，其中将所述生物反应器偶联至细胞保留系统；

b)以非离心的方式浓缩所述细胞以产生浓缩的细胞群体；

c)冷冻保存浓缩的细胞群体以产生高密度冷冻细胞库。

2.权利要求1的方法，其中所述细胞保留系统包含交替切向流过滤系统，所述交替切向流过滤系统包含过滤器。

3.权利要求2的方法，其中所述过滤器具有至少0.3m²，优选约0.3m²至约0.5m²，约0.5m²至约1.0m²，约0.7m²至约0.8m²，约1.0m²至约2.0m²，约2.0m²至约3.0m²，约3.0m²至约4.0m²，或约4.0m²至约5.0m²的表面积；和/或所述过滤器具有选自0.2μm、0.4μm和0.65μm的孔径。

4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述浓缩的细胞群体具有选自1.0x10^8个细胞/mL、1.1x10^8个细胞/mL、1.2x10^8个细胞/mL、1.3x10^8个细胞/mL、1.5x10^8个细胞/mL、1.7x10^8个细胞/mL和2.0x10^8个细胞/mL的细胞密度。

5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述冷冻保存包括：

a)以约5％至约10％体积/体积的终浓度将DMSO添加至浓缩的细胞群体；和/或

b)将至少一部分浓缩的细胞群体冷冻在适合于在冷冻保存条件下储存的容器中，优选所述容器是小瓶或冷冻袋。

6.前述权利要求中任一项的方法，其中所述高密度冷冻细胞库具有约1x10^8个细胞/mL的细胞密度。

7.前述权利要求中任一项的方法，其中所述灌注生物反应器：

(a)其灌注速率为约0.2nL/细胞/天至约0.5nL/细胞/天；和/或

(b)其培养的细胞培养物具有约6.8至约7.2的pH和/或至少约30％的溶解氧浓度；和/或

(c)其为柔性袋式生物反应器。

8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述高密度冷冻细胞库具有选自至少60％、至少约90％和至少约95％的解冻后活力。

9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞和/或经转染的细胞。

10.一种用于产生高密度冷冻细胞库的非离心方法，所述方法包括：

a)在灌注生物反应器中培养细胞，所述灌注生物反应器偶联至交替切向流过滤系统，其中所述生物反应器包含柔性袋式生物反应器，并且其中所述过滤器具有至少0.3m²的过滤器表面积，和具有至少50kDa的MWCO尺寸的过滤器，优选地所述培养的pH和溶解氧通过自动化方法或非自动化方法控制；

b)使用交替切向流过滤系统以非离心的方式浓缩所述细胞，以产生具有大于约1x10^8个细胞/mL的密度的浓缩的细胞群体；

c)冷冻保存所述浓缩的细胞群体以产生高密度冷冻细胞库，其中所述冷冻保存包括以约5％至约10％体积/体积的终浓度将DMSO添加至浓缩的细胞群体；并且其中所述高密度冷冻细胞库具有约1x10^8个细胞的细胞密度。