[发明专利]一种CAR-T培养基驯化的CTLL-2细胞用于IL-2的活性检测的用途及方法在审
| 申请号： | 202011047320.4 | 申请日： | 2020-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN114317665A | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 程尹;韩洪坤;黄加保 | 申请（专利权）人： | 上海药明巨诺生物科技有限公司;上海药明巨诺生物医药研发有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;G01N21/31 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 许亦琳;余明伟 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区中国（上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 car 培养基 驯化 ctll 细胞 用于 il 活性 检测 用途 方法 | ||
1.一种经CAR-T培养基驯化的CTLL-2细胞用于IL-2的活性检测的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：将经CAR-T培养基驯化的CTLL-2细胞用于CAR-T细胞培养时，培养基中IL-2的活性检测。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：CAR-T细胞培养时，培养基中IL-2的浓度范围是大于或等于100IU/ml且小于200IU/ml。
4.一种IL-2的活性检测方法，包括以下步骤：
1)以CAR-T基础培养基为稀释液，配制不同浓度的IL-2标准样品溶液；
2)以CAR-T基础培养基为稀释液，配制不同浓度的待测样品溶液；
3)将复苏的经CAR-T培养基驯化的CTLL-2细胞分别与各不同浓度的标准样品溶液和各不同浓度的待测样品溶液混合，并在适合CTLL-2细胞生长的环境下同时孵育；
4)显色并检测吸光度；
5)计算待测样本中IL-2的相对活性。
5.根据权利要求4所述的一种检测IL-2的方法，其特征在于，包括以下特征中的一项或多项：
所述步骤3)中所述CTLL-2的细胞活率大于85％；
所述步骤5)具体包括：分别读取标准药品曲线和待测样本曲线中半数抑制效应的IL-2活性浓度，计算待测样品的相对活性。
6.根据权利要求4所述的一种检测IL-2的方法，其特征在于：在步骤3)中，将复苏的经CAR-T培养基驯化的CTLL-2细胞进行洗涤，再用CAR-T基础培养基稀释。
7.根据权利要求4所述的一种检测IL-2的方法，其特征在于：驯化的所述CTLL-2细胞由包括以下步骤的方法制得：逐代提高CAR-T培养基在CTLL-2细胞培养基中占有的体积比，直至CAR-T培养基在所述CTLL-2细胞培养基中的体积占比为100％，所述CTLL-2细胞被驯化培养5-8代。
8.根据权利要求7所述的一种检测IL-2的方法，其特征在于：所述CAR-T培养基在所述CTLL-2细胞培养基中占有的体积比，每代次提高10-20％。
9.根据权利要求7所述的一种检测IL-2的方法，其特征在于，所述CTLL-2细胞培养基中含有供CTLL-2细胞生长的IL-2。
10.根据权利要求7所述的一种检测IL-2的方法，其特征在于，包括以下特征中的一项或多项：
所述CTLL-2细胞在驯化传代时的接种密度为1～3*105cells/ml；
所述CTLL-2细胞在驯化传代时的收获密度为0.8～1.6*106cells/ml；
所述CTLL-2细胞在驯化时的培养条件是温度35℃～37℃，4～6％CO2。
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