[发明专利]测定人血浆样本肾素活性的试剂盒和方法

说明书

本发明涉及一种测定人血浆样本肾素活性的试剂盒和方法，本发明的试剂盒包括(1)标准曲线工作液配制试剂盒；(2)内标工作液配制试剂盒；(3)样本前处理缓冲液配制试剂盒；(4)质控样本配置试剂盒；(5)反应终止液试剂盒；(6)液相色谱梯度洗脱液。采用本发明的试剂盒和方法，具有高效率，低成本，操作简便，准确度高和灵敏度高等优点。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，主要涉及一种测定人血浆样本肾素活性的试剂盒和方法。

背景技术

血浆肾素活性(Plasma Renin Activity，PRA)是衡量在肾素催化下，外周血中血管紧张素I产生效率的指数，在肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)所致高血压的分型诊断中有重要意义，其在肾动脉狭窄导致的高血压患者中活性明显增高，在继发性醛固酮增多症患者中则减低。在肾上腺功能不足的患者中，肾素活性也是衡量替代激素疗法有效性的重要指标，其在激素替代疗法效果充分的患者中数值正常，而在替代疗法效果不足的患者中数值会升高。肾素活性也是原发性醛固酮增多症(Primary Aldosteronism，简称PA)筛查的最重要指标。目前常用免疫测定技术检测血浆肾素活性(PRA)或直接肾素浓度测定(Direct Renin Concentration，DRC)，前者是通过测定血管紧张素I产生的速率来计算，而后者则通过放射免疫法直接测定血浆肾素浓度。目前直接肾素浓度检测方法正在不断改进中,不同方法或试剂所得的测定结果相差甚远，还需进行大规模的临床试验或人群研究，才有可能取代肾素活性检测成为一线检测方法。免疫法测定肾素活性则存在免疫法地固有缺陷，方法特异性较差，存在交叉偶联反应，灵敏度较低，线性范围较窄，前处理过程较复杂，无法满足实际临床上原醛症患者较低水平PRA的检测需求。然而现有的高效液相色谱质谱检测方法需要比较复杂的前处理固相提取操作(SPE)或者要额外增加或者改装二维液相色谱系统，方法较复杂，检测仪器和耗材成本高，技术难度高，不适合临床的大批量样本处理的需要，推广难度较大。此外，肾素活性检测的结果容易受到实验条件的影响，例如缓冲盐浓度，pH，血浆基质，孵育的温度等，经常遇到室内和室间的检测偏差，如何控制结果和数据的准确性和重现性也是现有肾素活性检测中的重要难点问题。因此迫切需要一种改进的人血浆样本肾素活性检测的高效液相色谱串联质谱分析方法以及与其配套的可覆盖从前处理到仪器检测的全流程的完善的质控体系，使得该方法具有高效率、高通量、低成本、操作简便，准确度高和灵敏度高的优点，同时对检测全过程的准确性和结果重现性进行有效监控，保证实际临床肾素活性检测的准确性，便于临床推广和应用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种改进的人血浆样本肾素活性检测的高效液相色谱串联质谱分析试剂盒以及分析方法。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明一方面涉及一种测定人血浆样本肾素活性的试剂盒，所述试剂盒为高效液相色谱串联质谱分析试剂盒，其包括如下组分：

(1)标准曲线工作液配制试剂盒：其包括血管紧张素I标准品、40-60体积％浓度的甲醇水溶液、1-8质量％浓度牛血清白蛋白BSA水溶液；

(2)内标工作液配制试剂盒：其包括血管紧张素I同位素内标ANG I-¹³C¹⁵N、40-60体积％浓度的甲醇水溶液、50-100mg/mL硫酸锌水溶液以及甲醇；

(3)样本前处理缓冲液配制试剂盒：50-200mM浓度的苯甲基磺酰氟甲醇溶液、pH到5.45-5.50之间的0.5-2mol/L Tris和0.1-0.5mol/L EDTA缓冲溶液；

(4)质控样本配置试剂盒：其包括EDTA抗凝的血浆样本和血管紧张素I标准品溶液；

(5)反应终止液试剂盒：甲酸；

(6)液相色谱梯度洗脱液：体积比0.05-0.2％甲酸水溶液，体积比0.05-0.2％甲酸的甲醇溶液，在梯度洗脱程序中两者的体积比为90～5％：10～95％。