[发明专利]测定人血浆样本肾素活性的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种测定人血浆样本肾素活性的试剂盒，所述试剂盒为高效液相色谱串联质谱分析试剂盒，其包括如下组分：

(1)标准曲线工作液配制试剂盒：其包括血管紧张素I标准品(Ang I)、40-60体积％浓度的甲醇水溶液、1-8质量％浓度牛血清白蛋白(BSA)水溶液；

(2)内标工作液配制试剂盒：其包括血管紧张素I同位素内标ANGI-¹³C¹⁵N、40-60体积％浓度的甲醇水溶液、50-100mg/mL硫酸锌水溶液以及甲醇；

(3)样本前处理缓冲液配制试剂盒：50-200mM浓度的苯甲基磺酰氟甲醇溶液(PMSF)、pH到5.45-5.50之间的0.5-2mol/L三羟甲基氨基甲烷Tris和0.1-0.5mol/L乙二胺四乙酸EDTA缓冲溶液；

(4)质控样本配置试剂盒：其包括EDTA抗凝的血浆样本和血管紧张素I标准品溶液；

(5)反应终止液试剂盒：甲酸；

(6)液相色谱梯度洗脱液：体积比0.05-0.2％甲酸水溶液，体积比0.05-0.2％甲酸的甲醇溶液，在梯度洗脱程序中两者的体积比为90～5％：10～95％。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述标准曲线工作液中血管紧张素I的浓度介于0.2ng/mL-30ng/ml。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，所述标准曲线工作液配制试剂盒中BSA水溶液浓度为1-8质量％浓度。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，所述质控样本配置试剂盒保存在-20～-80℃条件下。

5.一种测定肾素活性的待测人血浆样本前处理工艺，其包括使用权利要求1-4任意一项所述试剂盒进行处理待测人血浆样本，其包括如下步骤：

(1)采用标准曲线工作液配制试剂盒制备标准储备液和标准曲线工作液；

(2)采用内标工作液配制试剂盒制备内标储备液和内标工作液；

(3)采用质控样本配置试剂盒配制质控样本，所述质控样本包括血管紧张素I低浓度和高浓度质控样本，是由EDTA抗凝的血浆样本中额外加入不同体积或浓度的(1)中的血管紧张素I标准储备液或标准溶液得到；所述质控样本包括肾素活性不同的低活性和高活性质控样本，其中高活性血浆样本为新鲜采集后的血浆样本，低活性血浆样本为新鲜采集血浆在2-8℃条件下放置3～7天处理后的血浆样本。

(4)采用样本前处理缓冲液配制试剂盒制备样本前处理缓冲液，将样本前处理缓冲液置于多孔板中；

(5)将待测样品平行取2份置于至少2个多孔板的样本孔中，其中一个多孔板在孵育2-4小时候后采用反应终止液甲酸终止再加入内标工作液配制试剂盒配制的内标工作液得到孵育后样本，离心取上清液；另一个多孔板混匀后立即采用反应终止液甲酸终止再加入内标工作液配制试剂盒配制的内标工作液得到未孵育样本，离心取上清液。

6.一种测定人血浆样本肾素活性的方法，其包括权利要求5所述的人血浆样本前处理工艺以及采用液相色谱串联质谱方法对孵育样本和未孵育样本分别进行检测的步骤和进一步检测误差质量控制步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，所述液相色谱采用梯度洗脱，色谱柱为C18柱，流动相A相为0.05-0.2体积％的甲酸水溶液，流动相B相为0.05-0.2体积％甲酸的甲醇溶液，流动相A和流动相B的体积比为90～5％：10～95％。