[发明专利]基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒，其特征在于：包括反应缓冲液与N-MID胶乳试剂，所述反应缓冲液包括0.5-5g/L的缓冲液、10-25g/L的无机盐、15-40g/L的增浊剂、0.5-2ml/L的防腐剂和25-50ml/L的稳定剂，溶剂为纯化水，所述N-MID胶乳试剂包括至少两种胶乳试剂，所述胶乳试剂由单抗与胶乳微球偶联而成。

2.如权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒，其特征在于：所述反应缓冲液与所述N-MID胶乳试剂体积比为4:1。

3.如权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液中的任一种。

4.如权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒，其特征在于：所述无机盐选自氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的任意一种或两种以上的按任意比例混合的混合物；所述增浊剂选自聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的任意一种或两种以上的按任意比例混合的混合物。

5.如权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为Proclin300或硫柳汞；所述稳定剂选自BSA、蔗糖、甘露醇中的任意一种或两种以上的按任意比例混合的混合物。

6.基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，量取0.1-0.5ml固含为10％的胶乳微球，加至磷酸盐缓冲液中进行清洗，之后在20000转/分钟的转速下进行离心30min后，去上清，用MES缓冲液对余下沉淀物重悬超声，加入质量浓度为2％的EDAC 0.1ml和质量浓度为4％的NHS 0.2ml进行活化，活化时间为0.5h，制得活化胶乳微球；

步骤2，取至少两株单抗，分别与制得的活化胶乳微球按体积比1:1-1:3混匀，并进行1-2h的偶联，在20000转/分钟的转速下进行离心30min后，去上清，用偶联缓冲液对余下沉淀物重悬超声，制取至少两种偶联后的胶乳微球；

步骤3，向上述至少两种偶联后的胶乳微球中分别加入0.35-0.85ml封闭液进行1-2h的封闭，封闭结束后，在20000转/分钟的转速下进行离心30min后，去上清，加入2-4ml的胶乳保存液重悬超声，得到至少两种胶乳试剂，然后将至少两种胶乳试剂混合均匀，得到N-MID胶乳试剂；

步骤4，称取缓冲液、无机盐、增浊剂、防腐剂和稳定剂，制得反应缓冲液，将反应缓冲液和N-MID胶乳试剂混合，得到基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒。

7.如权利要求6所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述N-MID胶乳试剂包括两种胶乳试剂，两种胶乳试剂按照体积比1:1-1:3混合。

8.如权利要求6所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述封闭液选自BSA、甘氨酸中的任意一种或两种以上的按任意比例混合的混合物。

9.如权利要求6所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述胶乳保存液按重量份包括5-20g/L的缓冲液、4-15g/L的稳定剂、0.5-2ml/L的防腐剂和1-5ml/L的表面活性剂。

10.如权利要求9所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定N-MID的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述表面活性剂选自吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的任意一种或两种以上的按任意比例混合的混合物。