[发明专利]一种生产A82846B的基因工程菌及其制备方法在审
| 申请号： | 202011039882.4 | 申请日： | 2020-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN114317383A | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 胡海峰;田勋 | 申请（专利权）人： | 国药集团健康产业研究院有限公司;中国医药工业研究总院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P21/00;C07K9/00;C12N15/03;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 a82846b 基因工程 及其 制备 方法 | ||
1.一种生产A82846B的基因工程菌，其特征在于，其是在生产A82846B的出发菌荒漠拟孢囊菌(Kibdelosporangium aridum)的基因组中同源重组整合了人工构建的attB位点，同时整合了内源卤化酶基因orf10和内源性糖基转移酶A基因orf11的基因工程菌。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述attB位点是同源重组插入的人工合成的外源基因片段。所述卤化酶基因orf10和糖基转移酶基因orf11来源于自身基因。
3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的卤化酶基因orf10的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，orf11的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，attB的核苷酸序列如SEQID No.3所示，同源重组质粒pKC1139-attB核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，质粒pSET152-orf10-orf11核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。
4.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，基因工程菌为荒漠拟孢囊菌SIPI-3927-D20(Kibdelosporangium aridum),保藏于中国微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.19794。
5.一种如权利要求1-4任一项所述基因工程菌的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括下列步骤：1)PCR人工合成attB的全基因；2)构建含attB的同源重组pKC1139-attB质粒，并转入大肠杆菌DH5α中；3)将带有重组质粒的大肠杆菌和生产A82846B的出发菌SIPI-3927进行接合培养；4)双交换筛选获得新宿主菌SIPI-3927-attB；5)PCR扩增或人工合成orf10、orf11或orf10-orf11的全基因；6)构建orf10、orf11或orf10-orf11的重组pSET152质粒；7)将构建的重组质粒转化到新宿主菌SIPI-3927-attB；8)将带有重组质粒的新宿主菌和生产A82846B的出发菌进行接合培养。
6.如权利要求5所述基因工程菌的制备方法，其特征在于，所述重组质粒的骨架为pKC1139质粒或pSET152；优选地，所述的中间宿主菌为大肠杆菌ET12567/pUZ8002；优选地，所述的接合培养为在MISP4琼脂培养基培养，温度为28℃。
7.一种A82846B的制备方法，其特征在于，包括将如权利要求1-4任一项所述的基因工程菌发酵，从发酵液中获得A82846B。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于国药集团健康产业研究院有限公司;中国医药工业研究总院，未经国药集团健康产业研究院有限公司;中国医药工业研究总院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202011039882.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
