[发明专利]美洛昔康半抗原和人工抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明提供美洛昔康半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。美洛昔康半抗原的结构如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示：美洛昔康人工抗原是将所述半抗原与载体蛋白偶联得到的。利用所述美洛昔康人工抗原免疫动物，可获得高特异性抗体。本发明首次制备了美洛昔康的半抗原、人工抗原及抗美洛昔康抗体，填补了国内外空白，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的美洛昔康检测方法提供新手段。

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体地说，涉及美洛昔康半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

背景技术

美洛昔康(Meloxicam，简称MLX)是一种昔康类非甾体抗炎药物，其作用机制是通过选择性抑制环氧化酶-2(COX-2)来减少前列腺素等炎性介质的生成而发挥解热、镇痛和抗炎作用。美洛昔康在畜牧养殖业中使用广泛，临床上常用于各种疾病感染导致的猪、牛、马等大型动物的急性炎症与疼痛；其与抗生素联合用药，具有显著的药物协同作用，能够有效改善疾病的临床症状。

由于美洛昔康具有良好的抗炎、镇痛效果与价格低廉等优点，使得其在预防与治疗食源性动物疾病感染时，缺少节制，过量使用，造成动物性食品中药物残留超标，危害人体健康。

为加强对动物源性食品中美洛昔康的残留监管，保证动物产品质量安全，许多国家和地区都对食源性动物组织中美洛昔康最大残留限量作出了规定：欧盟委员会规定美洛昔康在食源性动物不同组织的最大残留限量为15-65μg/kg；日本肯定列表规定美洛昔康在动物不同组织的最大残留限量为10-50μg/kg。

目前，兽药残留检测常用的方法有气相色谱、高效液相色谱以及气质联用等理化分析方法。这些方法虽然特异性强、灵敏度高，但是样品前处理复杂繁琐，检测时间长，成本也较高，推广使用受到限制。免疫分析方法是一种基于抗原与抗体特异性反应的定性定量分析方法，该方法特异性强、灵敏度高，操作简单，反应快速，适合现场大量样本的实时检测。

已知影响免疫分析方法的核心因素是抗体的特异性和亲和性，而抗体的性质又取决于半抗原的分子结构，因此半抗原的设计与合成即成为制备特异性抗体和建立小分子兽药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。

发明内容

本发明的目的是提供美洛昔康半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供美洛昔康半抗原，其结构如式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ所示：

第二方面，本发明提供所述美洛昔康半抗原的制备方法，当所述半抗原为式Ⅰ所示化合物时，其制备方法包括如下步骤：

(1)称取10-30g 2-氨基噻唑-5-甲酸于5-20mL无水乙醇中，加入5％浓硫酸，50-60℃反应过夜，冷却至室温后倒入100mL饱和碳酸钠水溶液中，加乙酸乙酯提取，旋干，得化合物A；

(2)将化合物A和10-30g磺酰胺甲基物加入5-20mL二甲苯中，60-80℃回流反应24h，冷却至室温后倒入20mL石油醚中，抽滤，得化合物C；

(3)将化合物C溶于30-70mL四氢呋喃中，滴加0.3-0.7mL 1M氢氧化钠溶液，40-60℃反应1-3h，浓缩除去四氢呋喃，加入20mL水，用1M盐酸调pH至3-4，析出的固体物质即为式Ⅰ所示化合物。

其中，化合物A、磺酰胺甲基物和化合物C的结构分别如下：

当所述半抗原为式Ⅱ所示化合物时，其制备方法包括：称取10-20g对氨基苯丙酸和20-40g磺酰胺甲基物加入到10mL二甲苯中，60-80℃回流反应24h，冷却至室温后倒入20mL石油醚中，抽滤，得到固体物质即为式Ⅱ所示化合物。

当所述半抗原为式Ⅲ所示化合物时，其制备方法包括如下步骤：