[发明专利]一种飞行时间核酸质谱参数确定方法

说明书

本发明为一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，包括如下步骤：S1.调谐硬件，用调谐参考品调整飞行时间核酸质谱硬件调谐参数；S2.验证特性，用验证参考品确认飞行时间核酸质谱质谱特性参数；S3.确认识别，用确认参考品验证飞行时间核酸质谱检测符合率；S4.固化参数，将上述步骤中的参数存储和/或固化到飞行时间核酸质谱以便重复使用。本发明涉及一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，能够通过参考品确定和固化质谱仪器的硬件参数、验证参数、确认参数，确定质谱仪器的质荷比、峰高、分辨率、信噪比、基线、检测符合率等测量关键性能，为质谱仪器提供检测结果提供必要的条件。

技术领域

本发明涉及一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，特别是涉及需要参考品调谐和性能确认的质谱仪器。

背景技术

随着基因工程的突起，质谱仪器的不断发展，在基因测序，药物临床和遗传学等方面的广泛运用，对质谱仪器的性能参数提出了更高的要求，飞行时间核酸仪器的原理为，在真空环境中，样品与芯片基质结晶，在激光器的激光发射下，电离出离子使其飞行，在真空室的环境里，根据质荷比，在相同的环境下，质荷比小，较早的到达离子检测器，质荷比大，较晚的到达检测器，使之进行分离，并确定分子量。核酸质谱检测通过检测核苷酸的分子量差异识别核苷酸的类型，对于质谱系统的分子量测量的准确性要求较高，为了更好的校准分子量和验证校准的准确性并将相关的硬件进行固化，以便重复检测。

发明内容

基于参考品调谐、验证和确认质谱仪器的峰高，分辨率和信噪比、基线、检测符合率，提供一种调谐质谱仪器参数的方法。

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，这样仪器能够有效检测样本分子量，进而的识别核酸信息。

本发明所采取的技术方案是：一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，包括如下步骤：

S1.调谐硬件，用调谐参考品调整飞行时间核酸质谱硬件调谐参数；

S2.验证特性，用验证参考品确认飞行时间核酸质谱质谱特性参数；

S3.确认识别，用确认参考品验证飞行时间核酸质谱检测符合率；

S4.固化参数，将上述步骤中的参数存储和/或固化到飞行时间核酸质谱以便重复使用。

作为优选，所述所述S1调谐硬件的步骤如下：

S11.选取飞行时间核酸质谱质量范围典型质谱峰，作为调谐特征峰，调谐特征峰至少包含位于质谱范围的3个特征峰；

S12.根据选定特征峰的质荷比及浓度设定，制作相应分子量的寡核苷酸引物序列，并将引物序列制作成调谐参考品；

S13.将调谐参考品放入飞行时间核酸质谱设备，进行质谱检测，通过一元二次方程m＝At²+Bt+C拟合曲线，计算质荷比(m/z)，获得调谐参考品的质荷比飞行时间基线及硬件调谐参数；

S14.暂存硬件调谐参数。

进一步地，所述步骤S13包括如下步骤：

S131.手动操作质谱仪，并进行质谱检测，利用硬件初始值多次质谱检测获得调谐特征峰的质谱数据，观察包含但不限于延迟时间、峰高、信噪比、分辨率、基线质谱峰原始数据；

S132.调整延迟时间，通过调整数模转换器起始采样的延时时间，使得质荷比与理论值的相对标准差不大于0.1％～10％，优选1％；

S133.将三个质谱峰的已知质荷比及数模转换器的采用时间带入m＝At²+Bt+C求解，得到ABC三个初始校准参数；

S134.调整加速电压，使获得多次原始的质谱范围质荷比与理论值差异小于1～10，优选3，如果达不到优选值，可进一步调整S132；