[发明专利]一种飞行时间核酸质谱参数确定方法

权利要求书

1.一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.调谐硬件，用调谐参考品调整飞行时间核酸质谱硬件调谐参数，即调谐参考品有具体已知的调谐特征峰位置，通过硬件调试使质谱峰到目标位置出现；

S2.验证特性，用验证参考品验证飞行时间核酸质谱特性参数，即验证参考品有具体已知的调谐特征峰位置，包含调谐参考品的峰或增加已知目标峰；

S3. 确认识别，用确认参考品确认飞行时间核酸质谱检测符合率，即确认参考品为质控检验参考品；

S4. 固化参数，将上述步骤中的参数存储和/或固化到飞行时间核酸质谱以便重复使用；

其中所述S1调谐硬件的步骤如下：

S11. 选取飞行时间核酸质谱质量范围典型质谱峰，作为调谐特征峰，调谐特征峰至少包含位于质谱范围的3个特征峰；

S12.根据选定特征峰的质荷比及浓度设定，制作相应分子量的寡核苷酸引物序列，并将引物序列制作成调谐参考品；

S13.将调谐参考品放入飞行时间核酸质谱设备，进行质谱检测，通过一元二次方程m=At2+Bt+C拟合曲线，其中m为质荷比，ABC为质谱峰的校准参数，计算质荷比m/z，获得调谐参考品的质荷比飞行时间基线及硬件调谐参数；

S14.暂存硬件调谐参数；

所述步骤S2验证特性包括如下步骤：

S21.选取飞行时间核酸质谱质量范围内典型质谱峰作为检测特征峰，检测特征峰包含调谐特征峰，性能特征峰，性能特征峰包含不同浓度，不同分子量的用于检测飞行时间核酸质谱的质荷比、分辨率、信噪比、峰面积性能的特征峰；

S22.根据选定检测特征峰的数值，制作相应分子量和相应浓度的寡核苷酸引物序列，并将引物序列制作成验证参考品；

S23.将验证参考品放入飞行时间核酸质谱设备，进行质谱检测，获得验证参考品的核酸质谱检测结果，包含质荷比、分辨率、信噪比、峰面数值，通过对比检测结果对应的检测阈值线，如果不满足阈值线要求则重新进行S1步骤，如果满足阈值线要求暂存特性参数，进行S3步骤；

所述步骤S3包括如下步骤：

S31. 选取飞行时间核酸质谱应用试剂盒检测已知样品或质控品作为确认参考品，确认参考品的包含不同浓度、不同质合比的引物序列，确认特性参考品确认参数包含识别信号类型、等位基因强度、最小信号强度、等位基因分数、引物延伸率、检测分析类型、最大损害阈值、识别置信度、基因型、检测准确率参数或/和阈值；

S32. 将确认参考品按照仪器使用手册进行操作，统计检测准确率，应符合仪器检测识别率的要求，进入S4步骤，如果不符合检测符合率要求，重复从S1至S3步骤。

2.根据权利要求1所述的一种飞行时间核酸质谱参数确定方法，其特征在于，所述步骤S13包括如下步骤：

S131.手动操作质谱仪，并进行质谱检测，利用硬件初始值多次质谱检测获得调谐特征峰的质谱数据，观察延迟时间、峰高、信噪比、分辨率、基线质谱峰原始数据；

S132. 调整延迟时间，通过调整数模转换器起始采样的延时时间，使得质荷比与理论值的相对标准差在0.1%~10%范围内；

S133. 将三个质谱峰的已知质荷比及数模转换器的采用时间带入m=At2+Bt+C求解，得到ABC三个初始校准参数；

S134.调整加速电压，使获得多次原始的质谱范围质荷比与理论值差异在1~10范围内；

S135.调整激光功率，功率越高，峰高值越大，使调谐特征峰的质谱峰峰高达到峰高最大值的50%-95%之间；

S136.通过调整激光聚焦及聚焦电压调整质谱峰的分辨率；

S137.调整离子检测器增益，使基线高度达到硬件最大值的10%以内，如果调谐特征峰的峰高不满足离子检测器增益50%-95%要求，同步调整激光器功率；

S138. 如果需要更优的质荷比的校准，执行完S134~S137后再执行S132~S133步骤即得到更优的校准参数。