[发明专利]一种发酵提取DHA的方法

权利要求书

1.一种发酵提取DHA的方法，其特征在于，所述发酵方法包括以下步骤：

(1)将裂壶藻藻粉和水混合，得到发酵培养基；

(2)在所述发酵培养基中接种混合菌液，发酵后静置或离心，得到第一DHA粗油；

(3)将所述第一DHA粗油在-10～0℃下冷冻后，过滤或离心，得到第二DHA粗油；

(4)将所述第二DHA粗油脱色后，脱胶脱臭，加入抗氧化剂，得到DHA藻油成品；

其中混合菌液中包括芽孢杆菌和假丝酵母菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中，裂壶藻藻粉和水的质量比为1：(10～20)；所述接种混合菌液后，发酵培养基中芽孢杆菌菌体的初始浓度为1～10×10⁶cfu/mL，假丝酵母菌菌体的初始浓度为1～10×10⁵cfu/mL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，混合菌液质量为发酵培养基质量的5～10％，混合菌液主要由芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液配制而成，芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液的体积比为(1～3):1，芽孢杆菌培养液中芽孢杆菌菌体浓度为10×10⁷cfu/mL，酵母菌培养液中酵母菌菌体浓度为1×10⁷cfu/mL。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌培养液由初始芽孢杆菌菌体经活化和扩增培养所得，其中芽孢杆菌扩增培养所用培养液包含葡萄糖、玉米粉、豆粕和水；所述酵母菌培养液由初始酵母菌菌体经活化和扩增培养所得，其中酵母菌扩增培养所用培养液包含蛋白胨、蔗糖和无机盐。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌扩增培养所用培养液包含以下质量百分比的组分：葡萄糖1.5％，玉米粉2％，豆粕4％，余量水；所述酵母菌扩增培养所用培养液包含以下质量百分比的组分：蛋白胨3.5％，蔗糖7.5％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.15％，硫酸铵0.1％，余量水。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌扩增培养的条件为：温度35～37℃，初始pH值7.0～7.2，转速200r/min，时间45～50h；所述酵母菌扩增培养的条件为：温度28～30℃，初始pH值5.5～6.0，转速200r/min，时间52～60h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为：温度为30～37℃，时间为1～48h，pH值为7.0～8.0。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中还包含以下重量份的组分：葡萄糖0.5％，蛋白胨0.2％，磷酸氢二钾0.5％，磷酸二氢钾0.3％。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，发酵后离心得到第二DHA粗油，离心条件为：先在2000-4000rpm转速下离心10-20min，再在8000-12000rpm转速下离心10-20min。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述酵母菌为解脂假丝酵母菌。