[发明专利]一种用于2019-nCoV E基因检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法

说明书

本申请公开了一种用于2019‑nCoV E基因检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法，属于病毒体外核酸检测技术领域。本申请的用于检测2019‑nCoV E基因的核酸组合物，包括三组引物探针组合中的任意一组，每组引物探针组合均包括正向引物、反向引物和探针；本申请还提供了一种包括上述任意一组引物探针组合的检测试剂盒，试剂盒中还包括酶混合物和PCR MIX，该检测试剂盒可以制备成液态或粉态。本申请的核酸组合物和检测试剂盒可以对2019‑nCoV E基因中的目标基因进行特异性扩增，灵敏度高，降低了假性结果出现的几率，检测结果准确可靠。

技术领域

本申请涉及病毒体外核酸检测技术领域，特别涉及一种用于2019-nCoV E基因检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法。

背景技术

2019年12月以来，陆续发现了多例不明原因肺炎病例，现已证实为一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。2020年1月12日，世界卫生组织将引起本次病毒性肺炎病例的病原体命名为2019-nCoV，2020年2月11日被国际病毒分类委员会命名为SARS-CoV-2。

2019-nCoV为RNA病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm，具有极强的传染性，主要经呼吸道飞沫传播（喷嚏、咳嗽）和接触传染，主要引起人类呼吸系统感染，感染者常出现发热、乏力、干咳，逐渐出现呼吸困难等症状，多数患者预后良好，部分患者起病症状轻微，无明显发热，严重者出现急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒及凝血功能障碍等症状，病情危重者可导致死亡。2019-nCoV是第7个已报导可感染人的冠状病毒，其余6个分别为HCoV-229E、HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-NL63，HCoV-HKU1及MERS-HCoV。其中HCoV-229E 和HCoV-NL63属于α属冠状病毒，HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-HKU1、MERS-CoV与2019-nCoV均为β属冠状病毒。

核酸检测是临床病原学诊断的常用方法，具有灵敏高、特异性强等优点。新型冠状病毒肺炎疫情发生以来，核酸检测是临床诊断、解除隔离、康复出院的重要诊断依据。基于TaqMan探针法的实时荧光PCR技术具有简单、快速、准确的优势，已广泛应用于临床病原体的检测，在2003年我国爆发的SRAS病毒的疫情控制方面做出重要贡献，是WHO推荐的MERS-CoV病毒检测方法之一，目前实时荧光RT-PCR技术已被列入我国2019-nCoV诊疗指南。

自疫情发生以来，国内外陆续涌现出了2019-nCoV核酸检测试剂盒，但是，从目前临床实际使用情况来看，现有的核酸检测试剂盒仍然存在假阴性的情况，会造成漏检，给疫情防控带来很大的隐患。其假阴性的原因可能是使用的引物序列都存在或多或少的引物区突变，特异性不高，从而无法特异性地扩增出目标基因，因此无法检测出样本中病毒的存在。鉴于此，目前仍需继续研发特异性高的核酸检测方案，以改善现有的核酸检测试剂盒存在的假阴性问题。

发明内容

针对现有的2019-nCoV核酸检测存在假阴性问题，本申请的目的是提供一种用于2019-nCoV E基因检测的核酸组合物，本申请的引物和探针组合能够特异性的扩增2019-nCoV E基因中的目标基因，且灵敏度高，从而能够准确的指示样品中2019-nCoV病毒的存在。

本申请的第二个目的在于提供一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，本申请试剂盒较少的操作步骤可有效降低操作失误率，且检测时间短、检测效果准确可靠。

本申请的第三个目的在于提供一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒生产方法，本申请只需要将基因扩增所用试剂进行混合冻干便可生产获得2019-nCoV检测试剂盒，生产方法简单，适合大规模生产。

为了实现上述第一个目的，本申请是通过以下技术方案得以实现的：