[发明专利]一种用于2019-nCoV E基因检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法在审
| 申请号： | 202011028626.5 | 申请日： | 2020-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN111926121A | 公开（公告）日： | 2020-11-13 |
| 发明（设计）人： | 张树文;葛斌文;刘光明;孙娈燕;蒋明军;苏晓红;李黎明 | 申请（专利权）人： | 南京黎明生物制品有限公司;中国医学科学院皮肤病医院（中国医学科学院皮肤病研究所） |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
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| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 2019 ncov 基因 检测 核酸 组合 及其 试剂盒 生产 方法 | ||
1.一种用于2019-nCoV E基因检测的核酸组合物，其特征在于：包括三组引物探针组合中的任意一组，每组引物探针组合均包括正向引物、反向引物和探针；
第一组正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示；
第一组反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；
第一组探针的序列如SEQ ID NO.3所示；
第二组正向引物的序列如SEQ ID NO.4所示；
第二组反向引物的序列如SEQ ID NO.5所示；
第二组探针的序列如SEQ ID NO.6所示；
第三组正向引物的序列如SEQ ID NO.7所示；
第三组反向引物的序列如SEQ ID NO.8所示；
第三组探针的序列如SEQ ID NO.9所示；
所述三组引物探针组合中的探针5’端均采用荧光报告基团修饰，探针的3’端均采用荧光淬灭基团修饰。
2. 一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的三组引物探针组合中的任意一组、酶混合物和PCR MIX。
3.根据权利要求2所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述PCR MIX包括PCR缓冲液、阳离子及dNTPs。
4. 根据权利要求3所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述PCR缓冲液为pH=8.3的Tris-HCl缓冲液。
5. 根据权利要求3所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述阳离子包括K+和Mg2+。
6.根据权利要求2所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述酶混合物包括热启动Taq酶、c-MMLV酶和RNasin。
7. 根据权利要求2所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阳性对照品，所述阳性对照品为含有目标基因序列的假病毒。
8.根据权利要求2-7任一所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述引物探针组合、酶混合物和PCR MIX均为液态，或引物探针组合、酶混合物和PCRMIX均为粉态。
9.根据权利要求8所述的一种用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒，其特征在于：所述引物探针组合、酶混合物和PCR MIX均为粉态时，所述试剂盒中还包括粉态的冻干保护剂。
10.一种权利要求9所述的用于2019-nCoV E基因检测的试剂盒生产方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.将液态的引物探针组合，液态的酶混合物和PCR MIX以及液态的冻干保护剂进行混合，得到反应混合物溶液；
其中，引物探针组合中正向引物和反向引物的终浓度均为50～250nmol/mL，探针的终浓度均为50～200nmol/mL；
b.将步骤a获得的反应混合物溶液进行冻干，获得冻干粉检测试剂。
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