[发明专利]一种高通量、快速的半定量免疫检测方法及检测试剂

说明书

本发明公开了一种高通量、快速的半定量免疫检测方法，该半定量免疫检测方法，以微球表面包被待测物的一个多克隆抗体或至少两个单克隆抗体后进行待测物的免疫检测，通过对原粒径的微球数量的减少量或减少比例计算进行待测物浓度的估算。本发明通过微球表面包被抗体与待测物形成微球聚合物，由此形成的微球粒径变化，达到对待测物的快速半定量检测。

技术领域

本发明设于免疫检测领域，具体涉及一种高通量、快速的半定量免疫检测方法及采用该方法的检测试剂。

背景技术

免疫检测在体外诊断、食品安全等诸多领域的应用非常广泛，在疾病筛查诊断、食品质量控制等方面有着非常重要的意义。一般来说，免疫检测指利用抗原、抗体特异性结合的方式对目标抗原或抗体进行检测，方法分为乳胶凝集、ELISA等。乳胶凝集又细分为手工法、利用分光光度计读数的胶乳比浊法。ELISA方法又根据所用检测底物的不同，细分为放射免疫、酶联免疫、荧光免疫、发光免疫等等。在实际应用的过程中，这些方法各有优缺点，如手工法简单，但灵敏度和准确度都较差。胶乳比浊法提升了灵敏度，但准确度不及ELISA方法。ELISA方法提升了灵敏度，但检测时间较长，一般至少30分钟以上才能报告结果。而基于干式纸条的ELISA方法尽管提升了检测速度，但难以进行高通量筛查。

对于某些检测项目来说，精确定量要求不高，只需确认待测物有或无，或半定量即可。例如多种病毒的筛查，食品中多种违禁物质的检测等等。目前的方法要么仪器设备昂贵，要么检测时间慢、要么无法多项同时检测，因此，有必要开发一种适合于快速、高通量检测的半定量免疫检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种能够快速实现半定量检测的免疫检测方法。

为了达到上述目的，本发明提供了一种高通量、快速的半定量免疫检测方法，该半定量免疫检测方法，以微球表面包被待测物的多克隆抗体或至少两个单克隆抗体后进行待测物的免疫检测，通过对原粒径的微球数量的减少量或减少比例计算进行样本中待测物浓度的估算。

其中，待测物浓度的估算方法为：

(1)制作粒径减少比例的标准浓度曲线：制备不同浓度梯度的待测物标准溶液，分别与表面包被抗体的微球进行免疫反应，测定对应粒径范围内微球的减少比例，制备待测物浓度-粒径减少比例的标准曲线；

(2)将样本进行免疫检测后的原粒径的微球数量的减少比例代入步骤(1)中制备的标准曲线中，获得其对应的待测物的浓度梯度范围，即为所估算的样本中待测物浓度。

本发明在进行多种待测物同时检测时，所采用的半定量免疫检测方法，通过分别制备多组粒径规格不同的微球，各组微球表面包被对应的不同待测物的一个多克隆抗体或至少两个单克隆抗体后同时进行多种待测物的免疫检测，通过对各组不同粒径的微球数量的减少量或减少比例计算进行样本中对应待测物浓度的估算。

其中，微球采用高分子微球，如聚苯乙烯微球、聚苯乙烯/聚甲基丙烯酸甲酯微球，聚甲基丙烯酸甲酯微球，聚苯乙烯/聚丙烯酸微球。

在部分实施例中，微球粒径在0.5～5μm之间。

在部分实施例中，微球优选采用聚苯乙烯微球。

本发明还提供了一种高通量、快速的半微球表面包被抗体的方法采用羧基共价交联、物理吸附。

在部分实施例中，微球表面包被抗体的方法优选采用羧基共价交联方法。

上述微球采用聚苯乙烯微球时，通过以下方法进行表面抗体包被：首先，制备羧基修饰的聚苯乙烯微球，然后经微球活化后，再进行抗体交联，最后进行封闭。

定量免疫检测试剂，该半定量免疫检测试剂通过方法以下方法制备：