[发明专利]检测重组慢病毒滴度的核酸组合物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测重组慢病毒滴度的核酸组合物，其特征在于，包括引物对和探针，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.2所示，所述探针上连接有荧光基团。

2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示。

3.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、HEX、VIC、CY5及ROX中的一种。

4.一种检测重组慢病毒滴度的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的检测重组慢病毒滴度用的核酸组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应缓冲液和DNA提取试剂中的至少一种。

6.一种检测重组慢病毒滴度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

用含有重组慢病毒的待测样品感染靶细胞，并提取感染后所述靶细胞中的基因组DNA，所述重组慢病毒上整合有CD247基因；

将所述基因组DNA与权利要求1～3任一项所述的检测重组慢病毒滴度的核酸组合物混合后进行实时荧光定量PCR扩增反应，得到CD247基因的Ct值；

根据所述CD247基因的Ct值以及由含有CD247基因的质粒标准品建立的标准曲线，得到提取的所述基因组DNA中的CD247基因的浓度；及

根据提取的所述基因组DNA中的CD247基因的浓度、感染前靶细胞的总数和感染后靶细胞的总数，计算所述待测样品中重组慢病毒的滴度。

7.根据权利要求6所述的检测重组慢病毒滴度的方法，其特征在于，在所述实时荧光定量PCR扩增反应中，退火的温度为56℃～62℃，退火的时间为2s～10s，延伸的温度为56℃～62℃，延伸时间为2s～10s。

8.根据权利要求6所述的检测重组慢病毒滴度的方法，其特征在于，所述靶细胞为293T细胞。

9.根据权利要求6所述的检测重组慢病毒滴度的方法，其特征在于，所述由含有CD247基因的标准品建立的标准曲线通过如下操作得到：

将CD247基因标准品进行梯度稀释，获得梯度浓度的所述CD247基因标准品；

将每一个浓度的所述CD247基因标准品分别与所述检测重组慢病毒滴度用的核酸组合物混合进行实时荧光定量PCR扩增反应，获取扩增每一个浓度的所述CD247基因标准品的Ct值；及

根据所述CD247基因标准品的Ct值与浓度的对应关系建立所述CD247基因标准品的标准曲线。

10.根据权利要求6～9任一项所述的检测重组慢病毒滴度的方法，其特征在于，所述根据提取的所述基因组DNA中的CD247基因的浓度、感染前靶细胞的总数和感染后靶细胞的总数，计算所述待测样品中重组慢病毒的滴度的步骤包括：

根据提取的所述基因组DNA中的CD247基因的浓度和提取的感染后靶细胞中基因组DNA的体积，计算感染后靶细胞中CD247基因的总拷贝数；及

根据公式：

计算所述待测样品中重组慢病毒的滴度。