[发明专利]一种采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物、探针和方法在审
| 申请号： | 202011016959.6 | 申请日： | 2020-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN112063734A | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 高水波;韩勇军;吴鸿;高海霞;王新洲;雷震;常红波;刘珊珊;秦楠 | 申请（专利权）人： | 河南省中医院(河南中医药大学第二附属医院) |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州天阳专利事务所(普通合伙) 41113 | 代理人： | 蔡文雅 |
| 地址： | 450002 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 采用 实时 荧光 定量 pcr 技术 检测 人类 血液 布鲁氏菌 引物 探针 方法 | ||
1.一种采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物和探针，其特征在于，所述的引物和探针序列是：
上游引物:5’-GGAAGGTTCAGAAACAACCAC-3’
下游引物：5’-GTTGTAACCGGCCTGAACAC-3’
探针：5’-FAM-TGCTGCTCCAGTTGACACCTTCTCG-BHQ1-3’
所述的引物和探针扩增的目标核昔酸序列为序列表中SEQ ID No.1。
2.一种采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物和探针在制备试剂盒中的应用。
3.一种采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，包括置于盒体内的用于定量检测人类血液中布鲁氏菌的特异性扩增引物和探针，从血浆中提取基因组DNA，并进行荧光定量PCR的试剂。
4.根据权利要求3所述的采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，所述的从血浆中提取基因组DNA，并进行荧光定量PCR的试剂包括：
（1）从人类血浆中提取基因组DNA所用试剂，包括蛋白酶K、细胞裂解液、清洗液1、清洗液2、洗脱液、无水乙醇、吸附柱；
（2）将DNA实时定量PCR所用试剂，包括布鲁氏菌的引物、探针。
5.一种检测人类血液中布鲁氏菌的检测方法，所述的检测方法不以有生命的人体或动物体为直接实施对象，其特征在于，包括以下步骤：
1）收集待测患者血浆，放入盛有抑制DNA降解溶剂的冻存管中，放至-80℃冰箱备用；
2）血浆DNA的提取；
3）利用布鲁氏菌的引物、探针进行实时定量PCR；
4）布鲁氏菌实时定量PCR的结果用CT值进行定量分析。
6.根据权利要求3或4或5任一项所述的采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增的条件为:
a. 预变性：95℃ 2 分钟
b. 变性：95℃ 15 秒
c. 退火/延伸：60℃ 30 秒，采集信号
d. 重复步骤b和步骤c，总共40个循环。
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