[发明专利]一种包含长链脂肪二酸侧链的多肽的制备方法

权利要求书

1.一种包含长链脂肪二酸侧链的多肽的固相合成方法，其中包含长链脂肪二酸的多肽具有式I所示结构；

其中，n＝4-30；

A₁和A₂分别为多肽段，A₁多肽段中包含5-50个氨基酸残基；

A₂多肽段中包含5-50个氨基酸残基；

其特征在于，包括以下步骤：

1)将含有6-32个碳原子的长链二酸化合物偶联至固相合成树脂上；得到长链二酸-固相合成树脂偶联物；

2)在长链二酸-固相合成树脂偶联物上偶联H-Glu(OAll)-OtBu；

3)脱除OAll保护基团，然后依次偶联H-AEEA-OAll、H-AEEA-OAll、Fmoc-Lys-OAll；

4)再逐一偶联用于形成A₂多肽段的羧基保护基团保护α羧基的氨基酸或酰胺基保护基团保护的氨基酸酰胺；

5)脱除Fmoc保护基，并逐一偶联用于形成A₁多肽段的Fmoc保护α氨基的氨基酸；

6)裂解所有保护基同时裂解树脂获得粗肽；

7)纯化得到包含长链脂肪二酸的多肽；

其中，包含长链脂肪二酸的多肽选自司美格鲁肽(Semaglutide)或替尔泊肽(Tirzepatide)。

2.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步骤3)中依次偶联H-AEEA-OAll、H-AEEA-OAll、Fmoc-Lys-OAll的方法为，偶联H-AEEA-OAll，然后脱除OAll保护基团，再偶联H-AEEA-OAll，然后脱除OAll保护基团，再偶联Fmoc-Lys-OAll，然后脱除OAll保护基团。

3.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步骤4)中，在步骤3)偶联的Lys上，从N端向C端延伸偶联，依次偶联氨基酸的方法为，偶联侧链和羧基均被保护基保护的氨基酸，然后脱除羧基保护基，再偶联侧链和羧基均被保护基保护的氨基酸，然后脱除羧基保护基，继续循环直至完成A₂多肽段；其中除C末端偶联的最后一个氨基酸外其他氨基酸的羧基保护基选自OAll保护基团；

C末端偶联的最后一个氨基酸羧基保护基选自-OtBu保护基团；

或者，

偶联侧链和羧基均被保护基保护的氨基酸，然后脱除羧基保护基，再偶联侧链和羧基均被保护基保护的氨基酸，然后脱除羧基保护基，继续循环形成多肽链，最后在C端末端偶联侧链和酰胺基均被保护的氨基酸酰胺；

其中除C末端偶联的最后一个氨基酸外其他氨基酸的羧基保护基选自OAll保护基团；

C末端偶联的最后一个氨基酸酰胺的酰胺基保护基选自Trt保护基团。

4.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步骤2)、3)、4)和5)中偶联条件为DIC与A的组合，或B、A和C的组合，或C与D的组合，其中A为HOBt或HOAt或Oxyma，B为HBTU、HATU、PyBOP，C为DIPEA或TMP或DMAP，D为T3P。

5.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步骤3)和4)中脱除OAll保护基团的方法为以Pd⁰(Ph₃P)₄和PhSiH₃对OAll保护基团进行脱除。

6.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，其中Pd⁰(Ph₃P)₄的摩尔量为OAll保护基团摩尔量的0.01-1.0，PhSiH₃的摩尔量为OAll保护基团摩尔量的1-10倍。

7.根据权利要求1所述的固相合成方法，其特征在于，步骤5)中，在步骤2)偶联的Lys上，从C端向N端延伸偶联，依次偶联氨基酸的方法为，偶联侧链和氨基均被保护基保护的氨基酸，然后脱除氨基保护基，再进行偶联直至完成A₁多肽段；其中氨基保护基选自Fmoc保护基团。