[发明专利]一种基于细菌模型评价活性化合物抗氧化应激效益的方法

说明书

本发明公开一种基于细菌模型评价活性化合物抗氧化应激效益的方法，包括以下步骤：(1)大肠杆菌的培养；(2)分组、氧化应激诱导、抗氧化物处理，建立空白对照组、模型组以及测试组，孵育后离心收集大肠杆菌；(3)建立甲酰赖氨酸的液质联用检测方法；(4)测定上述各组的甲酰赖氨酸含量；(5)测试组的抗氧化应激评价。本发明通过建立大肠杆菌的氧化应激模型，利用甲酰赖氨酸的含量评价氧化应激水平。与现有的技术相比，大肠杆菌培养操作简单、价格低廉，降低了测试成本，液质联用技术检测甲酰赖氨酸可直接反应氧化应激水平，并且该技术能够实现高通量检测，大大降低人力成本，结果也更准确可靠。

技术领域

本发明涉及活性化合物药效及副作用评估技术领域，特别是涉及一种基于细菌模型评价活性化合物抗氧化应激效益的方法。

背景技术

细胞呼吸、酶的催化过程、巨噬细胞吞噬等一系列生物过程都会产生活性氧，低浓度的活性氧在灭杀侵入性病原体、伤口愈合以及组织修复等方面发挥着积极的作用。然而，如果活性氧超负荷生成将打破生物体内的氧化物质和还原物质之间的平衡，形成氧化应激的环境，最终导致氧化性组织损伤。维护体内氧化物质和还原物质之间的平衡，增加体内抗氧化物质水平，是对抗氧化应激的有效途径。

在“大健康”领域中，提倡通过健康饮食的生活方式预防慢性疾病。“健康食品”一般富含天然抗氧化成分，能够对抗体内氧化应激，改善体内的组织损伤情况。虽然大部分“健康食品”体外检测表明有抗氧化作用，但尚需要有效的评价方法。目前对抗氧化剂的健康评价基本上是基于“衰老及慢性病的自由基学说”，采用整体动物血液或肝脏抗氧化酶活性分析法，或者用体外肝癌细胞(例如HeGp2)或者红细胞做模型，考察抗氧化剂对化学自由基引发剂所产生的活性氧自由基(ROS)的清除及对细胞膜的保护能力。但这些方法需要进行细胞培养，或者进行动物实验，使用细胞模型或者动物模型，建模所需时间较长，费用较高，对实验技能要求高，需要较多的时间和人力成本。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于细菌模型评价活性化合物抗氧化应激效益的方法，以解决上述现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种基于细菌模型评价活性化合物抗氧化应激效益的方法，包括以下步骤：

(1)大肠杆菌的培养：将大肠杆菌菌种加入无菌液体培养基中培养，待大肠杆菌生长进入对数期，离心后收集大肠杆菌，等渗溶液清洗后重悬于等渗溶液中，测定大肠杆菌死亡率小于20％，得到大肠杆菌悬浮液；

(2)分组、氧化应激诱导以及测试组给药处理：将步骤(1)所述大肠杆菌悬浮液均分为空白对照组、氧化应激诱导组、氧化应激诱导并给药测试组后，分别在37℃孵育2小时，测定大肠杆菌死亡率小于70％，离心后去上清，收集下层大肠杆菌；

(3)大肠杆菌中甲酰赖氨酸的提取：将步骤(2)中收集的各组大肠杆菌重悬后制样处理，得到甲酰赖氨酸提取液样本；

(4)测试品的抗氧化应激效果判别：测量步骤(3)中提取的各组甲酰赖氨酸提取液样本中的甲酰赖氨酸的含量并比较，进行统计学分析，若测试组比氧化应激诱导组中甲酰赖氨酸含量明显降低，则测试组的活性化合物具有抗氧化应激功能。

进一步的，在步骤(1)和步骤(2)中，所述测定大肠杆菌死亡率的方法为细胞染色法。

进一步的，在步骤(1)和步骤(2)中，所述空白对照组是向大肠杆菌悬浮液中加入大肠杆菌等渗溶液；所述氧化应激诱导组是向大肠杆菌悬浮液中加入氧化应激诱导剂，所述氧化应激诱导剂为诱导剂与大肠杆菌等渗溶液的混合物；所述氧化应激诱导并给药测试组是向大肠杆菌悬浮液中加入氧化应激诱导剂和活性化合物混合溶液。

进一步的，在步骤(2)中，所述空白对照组、氧化应激诱导组、氧化应激诱导并给药测试组的任意一组设置平行样品，所述平行样品数量大于两个，大肠杆菌在任意一个所述平行样品中的体积比为 1％-5％。