[发明专利]基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法

说明书

本发明提出的是一种基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，具体包括如下步骤：(1)缓冲液的配制；(2)底物ABTS溶液的制备；(3)葡萄糖溶液标准系列的配制；(4)葡萄糖氧化酶溶液的配制；(5)快速筛查葡萄糖；(6)半定量分析葡萄糖。本发明采用偶联过氧化物模拟酶和葡萄糖氧化酶双酶系统，通过肉眼判断酶催化作用后，体系颜色的变化和深浅来快速定性和半定量分析葡萄糖，其构建成本较低，方法简便，稳定性和重复性良好，可以推广应用到食品安全和临床检验等各种领域中的葡萄糖快速分析，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及的是过氧化物模拟酶及其制备和应用方法，具体涉及一种基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，属于化学检测分析技术领域，可应用于食品安全和临床检验领域。

背景技术

葡萄糖是生命活动的重要能量物质，其浓度水平是糖尿病诊断的一项重要生化指标。糖尿病是由饮食、遗传等因素共同作用而引起的以糖代谢紊乱为主要症状的慢性病，可引起失明、肾脏病、心脏病及神经损伤等。因此，快速准确检测食品和血液中葡萄糖含量对于糖尿病的治疗和控制有重大意义。

目前国内外快速检测葡萄糖方法目前主要有高效液相色谱法、煮沸滴定法、辣根过氧化物酶法、过氧化物模拟酶法、纳米粒子模拟酶法、固定化酶法等。由于天然酶具有高效催化功能、高度专一性和高度受控性，是目前检测葡萄糖的主要手段，但同时天然酶也具有稳定性差、易失活、不易制备等缺点，使其在实际应用过程中受限。经过长时间实践发现，上述检测方法存在如下缺陷：①检测使用的天然生物酶价格昂贵，导致生产成本增高；②试剂合成工艺复杂，对检测仪器或设备要求高；③检测工序步骤过多，费时费力，难以快速实施。因此，建立一种快速、低成本、灵敏检测葡萄糖方法十分重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有葡萄糖检测方法存在的成本高、工艺繁琐、费时费力等缺陷，提出一种原料廉价易得、操作简单、快速高效，偶联过氧化物模拟酶和葡萄糖氧化酶快速检测葡萄糖的方法，可应用于食品安全和临床检验等领域。

本发明的技术解决方案：基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，具体包括如下步骤：

(1)缓冲液的配制：用HCl调节缓冲液Tris的pH值至合理范围，依次添加适当浓度的NaCl、KCl，最后添加Triton X-100表面活性剂；

(2)底物ABTS溶液的制备：用步骤(1)中的缓冲液配制ABTS物质的量浓度为10mmol/L的底物ABTS溶液，在2～6℃下置于棕色玻璃瓶中保存备用；

(3)葡萄糖溶液标准系列的配制：葡萄糖固体先用纯水稀释至物质的量浓度为10mmol/L，再用步骤(1)中的缓冲溶液将其按浓度梯度稀释至所需浓度，临用现配；

(4)葡萄糖氧化酶溶液的配制：用步骤(1)中的缓冲液配制所需浓度的葡萄糖氧化酶溶液，临用现配；

(5)快速筛查葡萄糖：在常温常压下吸取适量待测溶液和葡萄糖氧化酶溶液，置于比色皿、试管、离心管或酶标板微孔中混合，反应10min后，依次加入适量过氧化物模拟酶和底物ABTS溶液，以手摇或仪器涡旋等方式进行反应，反应5min后，通过肉眼观察溶液是否从无色变成绿色，若显色，则快速定性存在葡萄糖；

(6)半定量分析葡萄糖：在常温常压下吸取适量不同浓度梯度的葡萄糖溶液和葡萄糖氧化酶溶液，依次置于比色皿、试管、离心管或酶标板微孔中混合，作为半定量样品，反应10min后，依次加入适量过氧化物模拟酶和底物ABTS溶液，以手摇或仪器涡旋等方式进行反应，反应10min后，筛选颜色变化明显的相应半定量样品，以其溶液颜色制作标准色阶卡，通过比较标准色阶卡颜色的深浅，快速判断样品中葡萄糖含量。

进一步的，所述步骤(4)和(5)中测定葡萄糖的反应时间为15～20min。