[发明专利]基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法

权利要求书

1.基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

(1)缓冲液的配制：用HCl调节缓冲液Tris的pH值，依次添加NaCl、KCl，最后添加TritonX-100表面活性剂；

(2)底物ABTS溶液的制备：用步骤(1)中的缓冲液配制ABTS物质的量浓度为10mmol/L的底物ABTS溶液，在2～6℃下置于棕色玻璃瓶中保存备用；

(3)葡萄糖溶液标准系列的配制：葡萄糖固体先用纯水稀释至物质的量浓度为10mmol/L，再用步骤(1)中的缓冲溶液将其按浓度梯度稀释，临用现配；

(4)葡萄糖氧化酶溶液的配制：用步骤(1)中的缓冲液配制葡萄糖氧化酶溶液，临用现配；

(5)快速筛查葡萄糖：在常温常压下吸取适量待测溶液和葡萄糖氧化酶溶液，置于比色皿、试管、离心管或酶标板微孔中混合，反应10min后，依次加入适量过氧化物模拟酶和底物ABTS溶液，以手摇或仪器涡旋等方式进行反应，反应5min后，通过肉眼观察溶液是否从无色变成绿色，若显色，则快速定性存在葡萄糖；

(6)半定量分析葡萄糖：在常温常压下吸取适量不同浓度梯度的葡萄糖溶液和葡萄糖氧化酶溶液，依次置于比色皿、试管、离心管或酶标板微孔中混合，作为半定量样品，反应10min后，依次加入适量过氧化物模拟酶和底物ABTS溶液，以手摇或仪器涡旋等方式进行反应，反应10min后，筛选颜色变化明显的相应半定量样品，以其溶液颜色制作标准色阶卡，通过比较标准色阶卡颜色的深浅，快速判断样品中葡萄糖含量。

2.根据权利要求1所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤(4)和(5)中测定葡萄糖的反应时间为15～20min。

3.根据权利要求1所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤(4)和(5)中的过氧化物模拟酶由分子内平行型G4-DNA与氯化血红素(hemin)通过π-π堆积作用自组装形成。

4.根据权利要求3所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，该过氧化物模拟酶的制备方法包括以下步骤：

①分子内平行型G4-DNA溶液的配制：将G4-DNA用缓冲液溶解，并在90～100℃下加热5～15min，加热结束后迅速在冰上冷却至室温，在2～6℃下静置过夜得到G4-DNA溶液，备用；

②氯化血红素溶液的配制：取物质的量浓度为10mmol/L的氯化血红素储备液，用二甲基亚砜溶解得氯化血红素工作液，于-15～-25℃保存，将氯化血红素工作液用缓冲液稀释成氯化血红素溶液，备用；

③过氧化物模拟酶的建立：将步骤①中的G4-DNA溶液与步骤②中的氯化血红素溶液等体积混合，在室温下孵育，得过氧化物模拟酶。

5.根据权利要求4所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤①中最终制备的G4-DNA溶液的物质的量浓度为1～10.0μmol/L，G4-DNA的序列包括5’-(X_nG₃)4X_n-3’，其核心结构为5’-(X_nG₃)₄-3’，其中X表示A、T、G、C任意核酸碱基，n为1～3的自然数。

6.根据权利要求4所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤②中最终制备的氯化血红素溶液的物质的量浓度为2～20.0μmol/L。

7.根据权利要求4所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤①和②中的缓冲液每1L中各组分含量如下：Tris/HCl5～50mmol、NaCl 50～200mmol、KCl 5～50mmol、Triton X-100 50～300μL。

8.根据权利要求7所述的基于过氧化物模拟酶活性快速检测葡萄糖的方法，其特征在于，其中Tris/HCl的pH值为5.0～9.0。