[发明专利]一种分离纯化人抗凝血酶Ⅲ的方法

权利要求书

1.一种分离纯化人抗凝血酶Ⅲ的方法，包括采用亲和层析对人抗凝血酶Ⅲ进行分离纯化，其特征在于，所述亲和层析的凝胶是以单分散多孔交联聚丙烯酸酯微球为基质与肝素钠偶联所得，所述单分散多孔交联聚丙烯酸酯微球经过表面亲水化改性；采用所述亲和层析对人抗凝血酶Ⅲ进行分离纯化，人抗凝血酶Ⅲ的柱保留时间缩短至不超过3min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球的粒径为65μm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球的孔径为

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述亲和层析是UniGel-65 Heparin亲和层析。

5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，所述亲和层析包括如下步骤：含有人抗凝血酶Ⅲ的样品上亲和层析柱后，先使用平衡液冲洗层析柱至少1个柱体积，再使用洗涤液洗涤；

优选地，所述平衡液冲洗层析柱1-2个柱体积。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述平衡液含：0.01-0.03mol/L枸橼酸钠，0.1-0.14mol/L氯化钠，pH 6.0-8.0。

7.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，所述亲和层析包括如下步骤：含有人抗凝血酶Ⅲ的样品上亲和层析柱后，用洗涤液洗涤，所述洗涤液的电导率为20～45mS/cm。

8.根据权利要求5或7任一项所述的方法，其特征在于，所述含有人抗凝血酶Ⅲ的样品任选自：去冷沉淀血浆，或去冷沉淀血浆经DEAE Sephdex A50凝胶吸附后得到的DEAESephdex A50吸附后血浆或以DEAE Sephdex A50吸附后血浆为起始原料分离纯化人抗凝血酶Ⅲ的中间样品，

或改良K-N法组份Ⅳ沉淀溶解液或以改良K-N法组份Ⅳ沉淀溶解液为起始原料分离纯化人抗凝血酶Ⅲ的中间样品，

或Cohn组分IV-1沉淀溶解液或以Cohn组分IV-1沉淀溶解液为起始原料分离纯化人抗凝血酶Ⅲ的中间样品。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述含有人抗凝血酶Ⅲ的样品是去冷沉淀血浆经DEAE Sephdex A50凝胶吸附后得到的DEAE Sephdex A50吸附后血浆，所述亲和层析步骤具体方法如下：a平衡预先使用平衡液冲洗层析柱直至电导平稳且与平衡液相同；b上样DEAE Sephdex A50吸附后血浆过滤后上UniGel-65 Heparin亲和层析柱；c冲洗使用平衡液冲洗层析柱1-2个柱体积；d洗涤使用洗涤液进行洗涤直至UV峰洗至基线；e洗脱使用洗脱液洗脱直至UV峰洗至基线，收集洗脱液即得到高纯度人抗凝血酶Ⅲ溶液。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述平衡液为：0.01-0.03mol/L枸橼酸钠，0.1-0.14mol/L氯化钠，pH 6.0-8.0；

和/或所述洗涤液为：0.01-0.03mol/L枸橼酸钠，0.3-0.6mol/L氯化钠，pH 6.0-8.0；

和/或所述洗脱液为：0.01-0.02mol/L枸橼酸钠，1.5-2.5mol/L氯化钠，pH 6.0-8.0。