[发明专利]一种与细毛羊羊毛性状相关的SNP标记及其检测引物组、试剂盒、检测方法和应用

说明书

本发明提供了一种与细毛羊羊毛性状相关的SNP标记及其检测引物组、试剂盒、检测方法和应用，属于分子标记检测技术领域；所述SNP分子标记位于绵羊第3号染色体第133486008bp位点；所述位点上存在A/C碱基突变，与细毛羊羊毛性状具有显著的相关性。本发明的SNP标记能够用于绵羊分子标记辅助育种。本发明提供的分子标记不受绵羊的年龄、性别等限制，能够用于细毛羊选育，甚至刚出生即可进行准确地筛选，能够显著促进细羊毛选育的育种进程。

技术领域

本发明涉及分子标记检测技术领域，具体地说，涉及一种与细毛羊羊毛性状相关的SNP标记及其检测引物组、试剂盒、检测方法和应用。

背景技术

角蛋白KRT74(Keratin,type II cytoskeletal 74)基因是调控毛囊发育的关键基因之一，存在于皮肤组织中，在毛囊的内根鞘(IRS)Huxley层中特异表达，对维持毛囊的结构起着重要作用。该基因突变后会影响角蛋白中间丝的形成，引起常染色体显性毛发(ADWH)综合症，其特征是毛发紧密卷曲。在细毛羊、半细毛羊和蒙古羊群体中进行选择信号筛选，发现KRT74基因座位的多态性变异对细毛羊羊毛性状的影响达到显著水平。

细毛羊以其天然纤维羊毛而闻名，羊毛用于纺织工业，是一种重要的农产品。羊毛的质量和产量取决于毛囊的发育，毛囊的发育是一个复杂的生物过程，涉及到许多不同的蛋白质。前期研究发现几个重要的基因与羊毛性状有关，包括纤维直径、羊毛颜色、卷曲频率(每厘米羊毛纤维长度的波数)和波形特征。然而目前细毛羊由于选育程度低，育种标记缺乏，开发利用程度低，都导致了细毛羊资源优势无法转化为经济优势。因此有必要开发细毛羊特异的分子标记，应用于细毛羊的选育。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与细毛羊羊毛性状相关的SNP标记及其检测引物组、试剂盒、检测方法和应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种与细毛羊羊毛性状相关的SNP标记，所述SNP分子标记位于绵羊第3号染色体第133486008bp位点；所述位点上存在A/C碱基突变，与细毛羊羊毛性状具有显著的相关性；所述SNP分子标记基于绵羊基因组序列信息版本号Oar_v4.0，2015年11月。

本发明还提供了用于检测上述方案所述SNP标记的引物组，包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQID No.2所示。

本发明还提供了一种用于检测上述方案所述SNP标记的试剂盒，所述试剂盒包括上述方案所述的引物组。

优选的，所述试剂盒中还包括dNTPs、Phanta Max Super-Fidelity DNA聚合酶和PCR反应缓冲液。

优选的，所述试剂盒中还包括标准阳性模板。

本发明还提供了一种用于检测上述方案所述SNP标记的方法，包括以下步骤：

1)提取待测绵羊的基因组DNA；

2)以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用上述方案所述引物组进行PCR扩增反应，获得PCR扩增产物；

3)检测所述PCR扩增产物的第274bp处的基因型，得到所述SNP位点的基因型。

优选的，步骤2)中所述PCR扩增反应的体系以25μl计包括以下组分：待测绵羊的基因组DNA 1μl，正向引物和反向引物各1μl，dNTP mix 0.5μl，Phanta Max Super-FidelityDNA聚合酶0.5μl，2×PCR反应缓冲液12.5μl和余量的双蒸水；

所述待测绵羊的基因组DNA的浓度为50～100ng/μl；所述正向引物和反向引物的浓度分别为10pmol/μl；所述dNTPmix的浓度为10mmol/L。