[发明专利]耐药基因sul1的RPA检测引物组、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种耐药基因sul1的RPA检测引物组，其特征在于，包括3对引物和1个探针，引物和探针如下：

sul1-F1：ATGCACCGTGTTTCAATCGACAGCTTCCAACCG；SEQ ID NO1；

sul1-R1：GAAGGTGACCGGTGCGGGTGGCGATGCCATCCCG；SEQ ID NO2；

探针sul1-probe：5’-TCCTGACCCTGCGCTCTATCCCGATATTGCTCTGCAGTCCGCCTC-3’，SEQ IDNO3；

其中，离5’端碱基数28bp的胸腺嘧啶T由FAM荧光基团标记；离5’端碱基数29bp的G和30bp的C之间的碱基插入四氢呋喃残基；离5’端碱基数31bp的T由荧光淬灭基团BHQ标记。

2.一种基于权利要求1所述引物组的检测试剂盒，其特征在于，包括：冻干粉、去离子水、聚乙二醇、10μmol/Lsul1-F1、10μmol/Lsul1-R1、10μmol/L探针sul1-probe和280mmol/L醋酸镁溶液。

3.如权利要求2所述的的检测试剂盒，其特征在于，所述冻干粉的制备方法如下：将220ng/μL的重组酶RecA 11μg、200ng/μL的单链DNA结合蛋白gp3210μg、100ng/μL的DNA聚合酶IKlenow 5μg、70ng/μL的辅助蛋白uvsY 3.5μg、80ng/μL的核酸外切酶exoIII 4μg、3％的聚乙二醇1mg、30mM的Tris 0.12mg、120mM的乙酸钾0.49mg、3mM的ATP0.05mg、50mM的磷酸肌酸二钠盐0.51mg、275μM的dNTP 250μM、6％的蔗糖2.5mg和30％的甘油1mg混合均匀后经冷冻干燥即可。

4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，反应体系为50μL，将所述冻干粉和去离子水28.4μL，聚乙二醇12.5μL、sul1-F12μL、sul1-R12μL，探针sul1-probe 0.6μL，模板DNA 2μL和醋酸镁溶液2.5μL混合。

5.一种非诊断目的耐药基因sul1的RPA检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)提取待测样品的DNA为模板；

(2)利用权利要求1所述引物组或权利要求2或3所述试剂盒进行快速扩增及实时荧光检测。

6.如权利要求5所述的一种非诊断目的耐药基因sul1的RPA检测方法，其特征在于，扩增程序为：39℃恒温反应20min。

7.如权利要求6所述的一种非诊断目的耐药基因sul1的RPA检测方法，其特征在于，检测设备为RPA扩增检测仪或荧光定量PCR仪。

8.权利要求1所述引物组在制备检测耐药基因sul1的试剂盒中的应用。