[发明专利]一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌培养基及其筛选方法在审
申请号: | 202010986517.8 | 申请日: | 2020-09-18 |
公开(公告)号: | CN112063682A | 公开(公告)日: | 2020-12-11 |
发明(设计)人: | 刘威;王菁华;郭新明;孙义敏;李月兴;王松;方振兴;姜明月;张文天;潘虹;曾颖;张超 | 申请(专利权)人: | 黑龙江省科学院自然与生态研究所 |
主分类号: | C12Q1/04 | 分类号: | C12Q1/04;C12N1/02 |
代理公司: | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 | 代理人: | 岳泉清 |
地址: | 150040 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 五大连池 碳酸 矿泉水 水源地 细菌 培养基 及其 筛选 方法 | ||
一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌培养基及其筛选方法,本发明涉及嗜铁细菌的培养基及其筛选方法领域。本发明要解决现有使用Pipes为缓冲液筛选嗜铁细菌时需要调节pH,操作复杂的技术问题。该培养基为CAS检测平板培养基;方法:采集样品;制备LB液体培养基;制备CAS检测平板培养基;将样品加入到LB液体培养基,稀释;将稀释菌液涂布在CAS检测平板培养基上培养。本发明加入了特定的磷酸缓冲液,由于磷酸盐缓冲液缓冲能力强,在配制及培养过程中无需调pH及补加哌嗪二乙醇磺酸钠作为辅助,操作简便,嗜铁细菌筛选效果提高;并用五大连池重碳酸矿泉水替代蒸馏水,缩短筛菌培养时间。本发明用于筛选五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌。
技术领域
本发明涉及嗜铁细菌的培养基及其筛选方法领域。
背景技术
铁是地壳中含量居于第4位的元素,但其溶解性差,生物利用性极其有限。在有氧和中性pH值时,铁以难溶Fe(OH)3形式存在,在低铁环境下,绝大多数细菌和真菌都能通过非核糖体途径合成并分泌一种或几种嗜铁素(siderophore,又名高铁载体)。这些嗜铁素被分泌到微生物的细胞外或细胞表面作为螯合因子来获取Fe3+或者将铁变为可溶形式以便微生物利用,它们与Fe3+的特异性结合能力非常强(解离常数Ks为1022~1050),并且嗜铁素可以从各种水溶性和非水溶性的化合物中夺走Fe3+。它广泛用于医药、造纸印染工业,化肥工业、农业等领域。因此,嗜铁素是一种重要的生物活性物质,在生命代谢中起着重要的调节作用,对其的研究具有重要的理论和应用指导意义。
五大连池冷矿泉水享有“神泉”、“圣水”的美誉,对人类的健康疗养具有非常神奇的功效。五大连池冷矿泉的类型多样,其中药泉山铁质重碳酸盐矿水区被开发得最为全面。然而,从天然重碳酸矿泉水中筛选分泌嗜铁素的嗜铁菌研究未见报道。
发明内容
本发明要解决现有使用Pipes为缓冲液筛选嗜铁细菌时需要调节pH,操作复杂的技术问题,而提供一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌培养基及其筛选方法。
一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌培养基,该培养基为CAS检测平板培养基;
CAS检测平板培养基包括CAS蓝色检测液、磷酸盐缓冲液和混合液,
其中CAS蓝色检测液由铬天青(CAS)溶液、FeCl3盐酸溶液和十六烷基三甲基溴化铵溶液混合而成;
磷酸盐缓冲液采用Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、KH2PO4、NH4Cl、NaCl和去离子水配制;
混合液由蔗糖溶液、酸水解酪蛋白溶液、CaCl2溶液、MgSO4溶液、琼脂和五大连池重碳酸矿泉水混合获得。
所述一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法,具体按以下步骤进行:
一、采集五大连池重碳酸矿泉水水源地的水样或泥样,获得样品,采集深度为5~10厘米;
二、配制LB液体培养基:将酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl和蒸馏水混合均匀,分装,灭菌处理,获得LB液体培养基;
三、配制CAS检测平板培养基:
A、将铬天青溶于去离子水中,再加入FeCl3盐酸溶液,获得溶液a;
B、将十六烷基三甲基溴化铵溶于去离子水中,获得溶液b;
C、将溶液a加入到溶液b中,混合均匀,灭菌处理,得到CAS蓝色检测液;
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