[发明专利]一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌培养基及其筛选方法

权利要求书

1.一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌培养基，其特征在于该培养基为CAS检测平板培养基；

CAS检测平板培养基包括CAS蓝色检测液、磷酸盐缓冲液和混合液，

其中CAS蓝色检测液由铬天青溶液、FeCl₃盐酸溶液和十六烷基三甲基溴化铵溶液混合而成；

磷酸盐缓冲液采用Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、KH₂PO₄、NH₄Cl、NaCl和去离子水配制；

混合液由蔗糖溶液、酸水解酪蛋白溶液、CaCl₂溶液、MgSO₄溶液、琼脂和五大连池重碳酸矿泉水混合获得。

2.一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法，其特征在于该方法具体按以下步骤进行：

一、采集五大连池重碳酸矿泉水水源地的水样或泥样，获得样品，采集深度为5～10厘米；

二、配制LB液体培养基：将酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl和蒸馏水混合均匀，分装，灭菌处理，获得LB液体培养基；

三、配制CAS检测平板培养基：

A、将CAS溶于去离子水中，再加入FeCl₃盐酸溶液，获得溶液a；

B、将十六烷基三甲基溴化铵溶于去离子水中，获得溶液b；

C、将溶液a加入到溶液b中，混合均匀，灭菌处理，得到CAS蓝色检测液；

D、采用Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、KH₂PO₄、NH₄Cl、NaCl和去离子水配制磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液pH为6.8；

E、将磷酸盐缓冲液稀释，获得稀释缓冲液；

F、将蔗糖溶液、CaCl₂溶液、MgSO₄溶液、琼脂和五大连池重碳酸矿泉水混合，灭菌处理，获得混合液，降温至58～62℃，向混合液加入酸水解酪蛋白溶液、稀释缓冲液和CAS蓝色检测液，获得CAS检测平板培养基；

四、将步骤一获得的样品加入到步骤二获得的LB液体培养基，控制温度为35～37℃、转速为190～220r/min条件下振荡培养45～48h，然后按照10倍稀释法进行稀释，获得稀释菌液；

五、将步骤四获得的稀释菌液均匀涂布在步骤三获得的CAS检测平板培养基上，控制温度为26～28℃恒温培养3～5d，完成所述一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法。

3.根据权利要求2所述的一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法，其特征在于步骤二所述LB液体培养基中酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl和蒸馏水的用量比为5g∶10g∶10g∶1000mL。

4.根据权利要求2所述的一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法，其特征在于步骤A中CAS与去离子水的质量体积比为0.07g∶50mL，FeCl₃盐酸溶液与去离子水的体积比为1∶5，FeCl₃盐酸溶液中FeCl₃的浓度为1mmol·L^-1、HCl的浓度为1mmol·L^-1。

5.根据权利要求2所述的一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法，其特征在于步骤B中十六烷基三甲基溴化铵与去离子水的质量体积比为0.06g∶40mL。

6.根据权利要求2所述的一种五大连池重碳酸矿泉水水源地嗜铁细菌的筛选方法，其特征在于步骤C中溶液a加入到溶液b的体积比为60∶(37～42)。