[发明专利]一种缓解或治疗霉菌毒素对细胞危害的生物解毒剂

权利要求书

1.绿原酸与复合益生菌组合物复配在制备同时降低三种霉菌毒素联合毒力的生物解毒剂中的应用，其特征在于：所述生物解毒剂能够缓解仔猪空肠上皮细胞受三种霉菌毒联合作用，并恢复细胞活力；

所述三种霉菌毒素为黄曲霉毒素B₁、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素；

所述生物解毒剂由绿原酸200~600 µg/mL、地衣芽孢杆菌1×10⁵~1×10⁷CFU/mL、凝结芽孢杆菌1×10⁵~1×10⁷CFU/mL、丁酸梭菌1×10⁵~1×10⁷CFU/mL组成；

所述地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌购自广东省微生物菌种保藏中心；地衣芽孢杆菌保藏号GDMCC1.11，凝结芽孢杆菌保藏号 GDMCC1.645，丁酸梭菌保藏号GDMCC1.676；

应用时，所述黄曲霉毒素B₁的浓度范围为10～30μg/L，所述玉米赤霉烯酮的浓度范围为150～450μg/L，所述呕吐毒素的浓度范围为500～1500μg/mL；

取对数生长期仔猪空肠上皮细胞，常规消化计数后接种至96孔板，100μL/孔，每孔细胞数为1×10⁴个，然后将细胞培养板置于CO₂培养箱培养24h，吸弃掉原培养液，加入PBS缓冲液清洗；

加入用细胞培养基稀释的霉菌毒素，并用复合益生菌+绿原酸配伍组合处理；

仔猪空肠上皮细胞培养24h后，于每个孔内加入10μL的MTT，终浓度为0.5mg/mL，37℃、5％CO₂培养箱中共同孵化4h后，吸走培养液，加入150μL的DMSO，震荡10min使得甲瓒充分溶解，于490nm处测定吸光度值，测定仔猪空肠上皮细胞的相对活力。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述仔猪空肠上皮细胞为IPEC-J2。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述生物解毒剂由绿原酸400 µg/mL、地衣芽孢杆菌1×10⁵ CFU/mL、凝结芽孢杆菌1×10⁵ CFU/mL、丁酸梭菌1×10⁵ CFU/mL组成。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述复合益生菌在使用前，取地衣芽孢杆菌按照2％的接种量接种到新鲜的LB液体培养基中，37℃，180r/min，震荡培养24h后，测活菌浓度在1×10⁸ CFU/mL以上，待用；取凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌按照2％的接种量接种到新鲜的MRS液体培养基中，37℃，静置培养24h后，测活菌浓度在1×10⁸ CFU/mL以上，待用。

5.一种缓解三种霉菌毒素对上皮细胞损伤作用的复合生物解毒剂，其特征在于：所述生物解毒剂能够缓解仔猪空肠上皮细胞受三种霉菌毒联合作用，并恢复细胞活力；

所述三种霉菌毒为黄曲霉毒素B₁、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素；

所述生物解毒剂由绿原酸200~600 µg/mL、地衣芽孢杆菌1×10⁵~1×10⁷CFU/mL、凝结芽孢杆菌1×10⁵~1×10⁷CFU/mL、丁酸梭菌1×10⁵~1×10⁷CFU/mL组成；

所述地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌购自广东省微生物菌种保藏中心；地衣芽孢杆菌保藏号GDMCC1.11，凝结芽孢杆菌保藏号 GDMCC1.645，丁酸梭菌保藏号GDMCC1.676；

所述仔猪空肠上皮细胞受三种霉菌毒联合作用时，所述黄曲霉毒素B₁的浓度范围为10～30μg/L，所述玉米赤霉烯酮的浓度范围为150～450μg/L，所述呕吐毒素的浓度范围为500～1500μg/mL。