[发明专利]一种用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法

权利要求书

1.一种用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法，其特征在于，包括：

(1)对接种物进行富集培养，并对其产物进行分离、纯化；

(2)从分离、纯化的培养物中筛选烷烃降解菌；

(3)从得到的烷烃降解菌中进一步筛选具有硝酸盐还原特性的烷烃降解菌；

(4)利用多元线性回归方程预测步骤(3)筛选出的菌对三元复合驱采出水的破乳效果，包括以下步骤：

(a)构建破乳菌对三元复合驱采出水的破乳效果多元线性回归方程预测模型：

T＝-115.011+40.044×OD₆₀₀+4.136×OS-0.401×Zeta-0.719×NO₃^--N_rem.ratio

其中，NO₃^--N_rem.ratio为硝酸盐的去除率(％)；OD₆₀₀目标菌株在无机盐营养液中培养5d后的菌液吸光度值；OS为目标菌株在无机盐营养液中培养5d后菌液的排油圈大小(cm)，Zeta为目标菌的菌悬液zeta电位(mV/m)；T为三元复合驱采出水破乳后水相的透光率(％)；

(b)检测步骤(3)所得的菌液的OD₆₀₀值；

(c)用步骤(3)所得的菌种对三元复合驱采出水进行破乳，记录所形成的空白油圈直径，计为OS(cm)；

(d)检测步骤(3)中所得菌液的zeta电位(mV/m)；

(e)计算步骤(3)中所得菌液的硝酸盐去除率NO₃^--N_rem.ratio(％)；

(f)采用所述的多元线性回归方程计算破乳后水相的透光率，进而预测步骤(3)所得的菌种对三元复合驱采出水的破乳效果。

2.根据权利要求1所述的用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法，其特征在于，所述接种物取自活性污泥或三元复合驱采出水井周围被原油污染的油泥。

3.根据权利要求1所述的用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法，其特征在于，所述的富集培养方法为：将5～10g接种物投加进100mL无机营养盐培养基中，在30～35℃，120～200rpm条件下培养5d；然后吸取2～10mL的富集液投加进新的营养盐溶液中，重复上述培养步骤2～3次。

4.根据权利要求3所述的用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法，其特征在于，所述的无机营养盐培养基成分为：KNO₃ 3g/L，KH₂PO₄4g/L，K₂HPO₄ 3g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，CaCl₂ 0.02g/L，FeCl₃ 0.05g/L，微量元素溶液2mL/L，液体石蜡4％(v/v)，pH 7.0。

5.根据权利要求1所述的用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法，其特征在于，所述的烷烃降解菌筛选方法为：在一个含无机盐培养基的具塞试管中，接种一环经过分离纯化的培养物，在30～35℃恒温培养箱中，120～200rpm条件下培养1d。

6.根据权利要求1所述的用于强乳化三元复合驱采出水破乳的硝酸盐还原菌的筛选方法，其特征在于，所述具有硝酸盐还原特性的烷烃降解菌的筛选方法为：接种烷烃降解菌于已知硝酸盐浓度的无机盐营养培养基中，在恒温培养箱中培养3～5d；取适量培养液离心后，检测上清液中硝酸盐和亚硝酸盐的含量；硝酸盐含量减少并且亚硝酸盐积累的菌，即为具有硝酸盐还原特性的烷烃降解菌。