[发明专利]汉逊酵母重组COVID-19病毒样包膜颗粒疫苗细胞株

权利要求书

1.一种汉逊酵母重组COVID-19病毒样包膜颗粒疫苗细胞株，其特征在于，该细胞株中包括汉逊酵母重组COVID-19病毒样包膜颗粒S刺突蛋白的优选码DNA序列如SEQ ID NO:1所示；汉逊酵母重组COVID-19病毒样包膜颗粒M膜蛋白的优选码DNA序列如SEQ ID NO:2所示；汉逊酵母重组COVID-19病毒样包膜颗粒E包膜蛋白的优选码DNA序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的细胞株，其特在于，汉逊酵母为HU-11多形汉逊酵母，HU-11多形汉逊酵母的乳清酸苷-5-磷酸脱羧酶基因被破坏的DNA序列如SEQ ID NO：4所示。

3.根据权利要求1所述的细胞株，其特在于，该细胞株制备时pMPT-S-M-E质粒的构建过程是：从pMPT-M、pMPT-E质粒双酶切位点处分别获得M及E基因的表达框，以pMPT-S质粒为骨架，依次将M及E的表达框插入至pMPT-S质粒中Acc III酶切位点处；构筑后质粒在最后一个表达框的后面保留1个Sac I酶切位点，S与M表达框之间引入一个Nhe I酶切位点，M与E表达框之间引入一个Not I酶切位点；引入的Nhe I、Not I酶切位点在质粒中单一存在。

4.根据权利要求1所述的细胞株，其特在于，已经构建成功汉逊酵母重组COVID-19病毒样包膜颗粒疫苗转化子，经第13代半定量PCR筛选得到67株高拷贝细胞株；从第13代定量PCR筛选获得的细胞株中再次进行PCR筛选挑选出4株重组高拷贝细胞株COVID-19病毒样包膜颗粒疫苗工程细胞株，S棘蛋白、M膜蛋白和E包膜蛋白基因拷贝数为100个；异源整合在染色体的多个转座子位置；基因重组菌细胞株的遗传稳定性大于40个二分裂世代。

5.根据权利要求1所述的细胞株，其特在于，该细胞株的1mL种子管细胞，经过4至5级扩大培养和高密度发酵，细胞干重100克/升；种子细胞经24次二分裂倍增，发酵液体积扩大到1200升，生产发酵罐周期为80小时，年生产发酵55罐，能年产COVID-19病毒样包膜颗粒疫苗原液26.4公斤；能分装剂量20μg/针COVID-19疫苗13亿剂。

6.根据权利要求1所述的细胞株，其特在于，汉逊酵母重组COIDV 19包膜颗粒疫苗设计剂量为20μg/针；按免疫程序0、1、6月免疫接种3针；获得的免疫保护水平为：50％人群SARS-CoV-2中和抗体(NAb)滴度≥1000，判定为高应答，免疫保护5-8年；30％人群SARS-CoV-2NAb滴度为500-999，判定为正常应答，免疫保护3-5年；≤20％人群SARS-CoV-2NAb滴度为100-499，判定为正常应答，免疫保护1-3年；≤5％人群SARS-CoV-2NAb滴度为10-99，判定低应答，应按免疫程序为0、1、6月免疫复种3针。