[发明专利]采用LC-MS/MS测定Demethoxydendrocandin S含量的方法

说明书

本发明涉及采用LC‑MS/MS测定大鼠血浆及组织中Demethoxydendrocandin S含量的方法，属于生物医药技术领域；该方法包括以下步骤：（1）生物样品处理；（2）标准曲线的制备；（3）LC‑MS/MS测定，待测样品根据标准曲线得到待测样品中的Demethoxydendrocandin S含量。通过空白样品、QC样品进行相互校正，减少干扰性；通过基质效应样品和回收率样品来评价该方法的基质效应和回收率。应用LC‑MS/MS(高效液相色谱联用质谱)法可同时测定大鼠血浆和组织中的Demethoxydendrocandin S的浓度，该测试方法简单快速，具有较高的准确度和灵敏度，且空白基质无干扰性，以及具有优异的目标物质回收率。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种测定生物体(大鼠)给予一定剂量Demethoxydendrocandin S后生物样本(例如血浆、肝等组织)中的DemethoxydendrocandinS含量方法，为评估Demethoxydendrocandin S在体内的行为提供参考依据。

背景技术

石斛属(Dendrobiμm)为兰科石斛属多年生附生草本植物，药用始载于《神农本草经》，列为上品；石斛常做药用，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功能，用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热、目暗不明等多种病症。历代本草和《中国药典》均有记载，其中2020版中国药典收录的有4种，为金钗石斛(D.nobile)、鼓槌石斛(D.chrysotoxμm)、流苏石斛(D.fimbriatμm)、铁皮石斛(D.officinaleKimμraetMigo)。铁皮石斛被誉为九大仙草之首，自古以来就有“药中黄金”之称，民间称之为“救命仙草”，2018年1月，《国家卫生计生委》公布将铁皮石斛列入既是食品又是中药材(药食同源)名单，在浙江、云南两省进行试生产。

铁皮石斛具有多种药理功能，其中主要有增强免疫力、抗衰老、抗肿瘤、降血糖、促消化和抗炎症等。其中铁皮石斛素是铁皮石斛的特征性成分，在2008-2015年李燕等人从铁皮石斛中分离得到了18种DendrocandinA-R后，许多学者陆续从铁皮石斛中提取到新得化合物DendrocandinT、U和V；2012年王涵从云南铁皮石斛中提取出新的组分DendrocandinS，初步证明其具有抗炎和抗肿瘤的功效，能够显著抑制LPS刺激后巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌，进而促进凋亡蛋白PARP表达。之后有人又针对石斛素S及其衍生物做了一系列抗肿瘤增殖活性实验的研究，发现石斛素S对多种肿瘤细胞具有抑制作用，证明其具有广谱的抗肿瘤活性。

由于DendrocandinS在铁皮石斛中含量低，本实验采用化学合成的方法合成Demethoxydendrocandin S，在前期研究发现Demethoxydendrocandin S不仅能作用于秋水仙碱位点，能够抑制微管蛋白聚合，抑制细胞有丝分裂过程。还可以使细胞周期受到阻滞，并且促进细胞凋亡。高剂量Demethoxydendrocandin S处理组裸鼠肿瘤生长受到抑制。综上所述，Demethoxydendrocandin S使用时，主要通过诱导细胞周期停滞以及内在和外在凋亡途径，明显抑制CCRF-CEM细胞的存活。Demethoxydendrocandin S可以为急性T淋巴细胞白血病潜在的药物开发提供一定的依据，但是，到目前为止，还没有生物样品中Demethoxydendrocandin S的定量方法报道；而且关于Demethoxydendrocandin S在大鼠中的药代动力学的信息不足；目前还没有系统研究Demethoxydendrocandin S的含量测定和药代动力学。这些阻碍了它的应用和发展。

Demethoxydendrocandin S的动力学研究是至关重要的。本研究旨在建立灌胃后Demethoxydendrocandin S的在大鼠血浆和组织中的分布。

发明内容