[发明专利]一种复合免疫增强剂

权利要求书

1.一种复合免疫增强剂，由可溶性BCG菌体蛋白和协同增强免疫作用的辅助材料组成；

所述协同增强免疫作用的辅助材料是大分子真菌多糖；

所述大分子真菌多糖为银耳多糖或虫草多糖中的一种或多种；

所述BCG菌体蛋白与真菌多糖的混合比例为10:1；

所述BCG菌体蛋白及多糖提取和复合免疫增强剂的制备包括以下步骤：

(1)卡介苗菌体蛋白提取：牛结核分枝杆菌属卡介苗菌体培养，采用常规标准的液体培养方法获得，经液体培养后的卡介苗活菌，菌体浓度为5×10⁷/ml，经分离纯化后，每毫升菌液可获得大约30微克的菌体蛋白；获得的菌体经离心、收集破碎后，超速离心收集上清；冷冻干燥，得菌体蛋白，保存备用；

(2)真菌培养及真菌胞外多糖提取：

真菌培养基配制：精确称取蛋白胨5g，葡萄糖30g，酵母提取物5g，磷酸二氢钾0.1g，七水硫酸镁0.05g，蒸馏水1000ml，调整pH＝6.5；将液体培养基分装于500ml三角瓶中，115℃高压灭菌20min；将培养基取出，冷却至室温，在无菌条件下加入1ml1000×维生素母液，1ml1000×微量元素母液，得到最终的液体真菌培养基，用于后续的真菌菌丝体培养；固体真菌培养基的组成及配制方法与以上方法类似，但在灭菌前加入20g琼脂，灭菌，冷却至40℃后加入维生素及微量元素，分装到试管及培养皿中，得到固体真菌培养基；

真菌培养：将保存于冻干管中的银耳、蛹虫草三种丝状真菌分别转接到固体真菌培养基，25℃恒温培养箱中培养7-14d后，挑取菌丝，转接到液体真菌培养基，25℃摇床培养7-14d，得到真菌培养液；

真菌胞外多糖提取：将真菌培养液用纱布过滤去除菌丝球，分别得到三种真菌的培养上清，将1L培养上清与3L无水乙醇充分混合均匀，离心分离沉淀；沉淀用无水乙醇洗涤3次，每次乙醇用量50-100mL；将沉淀转移到冷冻真空干燥箱中干燥48h，分别得到银耳多糖及虫草多糖；

(3)将卡介苗菌体蛋白和真菌多糖按照10:1的比例混匀得到复合免疫增强剂。

2.根据权利要求1所述复合免疫增强剂，其特征在于，多种真菌多糖同时添加使用时，添加比例可以不同也可以相同。

3.权利要求1至2任一项所述复合免疫增强剂在制备疫苗佐剂中的应用，作为抗原制备或疫苗的添加剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，实际使用过程中，可根据实际需要，在保证生物安全性的前提下，作为疫苗添加剂可使用任一剂量。