[发明专利]一种基于二代测序的EGFR突变检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202010952481.1 | 申请日： | 2020-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN114164267A | 公开（公告）日： | 2022-03-11 |
| 发明（设计）人： | 郭圣明;李丹;刘彬 | 申请（专利权）人： | 上海星耀医学科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11 |
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| 地址： | 201315 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 二代 egfr 突变 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种基于二代测序的EGFR突变检测方法及试剂盒，包括：检测EGFR基因第18外显子SEQ No.1中的第2155、2156变异位点、EGFR基因第19外显子SEQ No.2的缺失突变、EGFR基因第20外显子SEQ No.3中2303~2369位点之间的突变和EGFR基因第21外显子SEQ No.4中2573~2582位点之间突变的特异性引物对（引物混合液）、多重PCR混合液、TE Buffer、纯化磁珠。
2.如权利要求1所述，其特异性引物对是指对EGFR基因第18外显子SEQ No.1中的第2155、2156变异位点，EGFR基因第19外显子SEQ No.2的缺失突变，EGFR基因第20外显子SEQNo.3中2303~2369位点之间的突变，以及EGFR基因第21外显子SEQ No.4中2573~2582位点之间突变位点而设计，能特异性扩增出包含EGFR基因第18外显子SEQ No.1中的第2155、2156变异位点，EGFR基因第19外显子SEQ No.2的缺失突变，EGFR基因第20外显子SEQ No.3中2303~2369位点之间的突变，以及EGFR基因第21外显子SEQ No.4中2573~2582位点之间突变位点的DNA片段的引物对。
3.如权利要求2所述，所含的特异性引物对选自具有SEQ No.5和SEQ No.6所示序列的引物对、SEQ No.7和SEQ No.8所示序列的引物对、SEQ No.9和SEQ No.10所示序列的引物对、SEQ No.11和SEQ No.12所示序列的引物对，所述特异性前引物的序列如SEQ No.13所示，所述特异性后引物的序列如SEQ No.14所示。
4.如权利要求1所述的方法与试剂盒，其特征在于所述的试剂盒组份和含量包括2μL引物混合液、2μL多重PCR混合液、2μL消化缓冲液、2μL消化酶混合液、2μL终止缓冲液、8μL第2轮PCR混合液、30μL TE Buffer、95μL纯化磁珠。
5.本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。
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