[发明专利]一种对酸敏感转座子插入突变体的反向筛选方法有效
| 申请号： | 202010951090.8 | 申请日： | 2020-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN112080546B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 季学猛;王硕 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12Q1/18 | 分类号： | C12Q1/18;C12N15/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津合正知识产权代理有限公司 12229 | 代理人： | 邢月;张艳梅 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 敏感 座子 插入 突变体 反向 筛选 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种对酸敏感转座子插入突变体的反向筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)转座子插入突变体库的构建；
(2)杀菌型抗生素和酸联合处理；
(3)细菌培养与单克隆挑取；
(4)细菌耐酸表型验证；
所述的转座子为质粒pUTminiTn5 Km；
所述的步骤(2)中的杀菌型抗生素和酸联合处理的方法如下：将细菌在酸性培养基中进行培养，然后向其中添加杀菌型抗生素继续培养；所述的酸性培养基的pH小于细菌的野生型最适生长pH；所述的酸性培养基的pH值为1.5-3.0；
所述的杀菌型抗生素为庆大霉素；所述的杀菌型抗生素的浓度限定为50mg/L。
2.根据权利要求1所述的对酸敏感转座子插入突变体的反向筛选方法，其特征在于：所述的步骤(1)转座子插入突变体库的构建的方法如下：将转座子扩增，然后将扩增后的转座子转入细菌中进行复制，通过杀菌性抗生素筛选，得到转座突变子。
3.权利要求1或2所述的对酸敏感转座子插入突变体的反向筛选方法的用途，其特征在于：所述的方法在反向筛选重组菌中的应用。
4.权利要求1或2所述的对酸敏感转座子插入突变体的反向筛选方法的用途，其特征在于：所述的方法在筛选转化子中的应用。
5.权利要求1或2所述的对酸敏感转座子插入突变体的反向筛选方法的用途，其特征在于：所述的方法在筛选自发突变或诱变剂诱变的菌种中的应用。
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