[发明专利]一种通过提高SA含量增强作物抗病性的方法及基因

权利要求书

1.一种从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因，其特征在于，所述从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因为OsS5H1和OsS5H2，所述OsS5H1的核苷酸序列为Seq IDNo.1，所述OsS5H2的核苷酸序列为Seq ID No.2。

2.如权利要求1所述的从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因，其特征在于，所述OsS5H1、OsS5H2进一步包括因插入、替代、缺失一个或多个碱基所产生的突变体等位基因以及衍生物。

3.一种如权利要求1所述的从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性基因编码的蛋白，其特征在于，所述蛋白为Seq ID No.1编码的Seq ID No.3、Seq ID No.2编码的Seq ID No.4。

4.如权利要求3所述蛋白，其特征在于，所述蛋白进一步与Seq ID No.3、Seq ID No.4所示序列有70％同源性的蛋白或者蛋白衍生物；

所述蛋白进一步包括因插入、缺失或替代一个或多个氨基酸所产生的功能发生改变的蛋白或者蛋白衍生物。

5.一种如权利要求1所述的从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性基因的鉴定方法，其特征在于，所述从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因的鉴定方法包括:

利用公共数据库选择编码水稻羟基化酶的候选基因，再通过体外酶活测定的方法鉴定催化SA生成羟基化SA的候选基因，利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得SA羟基化酶的基因编辑突变体。

6.如权利要求5所述的从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性基因的鉴定方法，其特征在于，所述从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因的鉴定方法进一步包括：

(1)OsS5H1、OsS5H2基因蛋白表达载体的构建，通过将cDNA序列连接至相关蛋白表达载体上，转化大肠杆菌表达相关蛋白，通过超声法破碎细胞膜过柱提取相关蛋白进行生化功能分析；

(2)OsS5H1、OsS5H2基因植物双元表达载体的构建，通过将cDNA序列连接至相关植物双元表达载体上，转化水稻，提取SA和2,5-DHBA,通过高效液相色谱(HPLC)进行定量，检测OsS5H1、OsS5H2的体内生化功能；

(3)s5h1s5h2突变体的创建，在OsS5H1、OsS5H2相应基因组序列上设计gDNA敲除片段构架至pC1300-Cas9载体，通过农杆菌转染水稻获得相关基因功能缺失的双突变体材料；

(4)s5h1s5h2突变体不同时期SA含量的测定，通过对OsS5H1、OsS5H2基因功能缺失突变材料SA含量进行分析，候选基因缺失使得SA含量升高，SA降解产物2,5-DHBA含量降低；

(5)s5h1s5h2突变体抗病性的分析，通过对大田成熟期的功能缺失突变体接种白叶枯菌，分析突变体和WT之间病斑长度的差异判断突变后其抗病性的变化；

(6)s5h1s5h2突变体农艺性状分析，对不同时期SA含量以及抗病性进行分析后，还需对相应的农艺性状进行分析。

7.一种如权利要求1所述从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因在调控植物抗病性中的应用，其特征在于，所述应用方法包括通过下调所述基因的表达或者功能缺失，调控植物抗病性。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用方法进一步包括：通过下调所述基因在植物中表达的蛋白表达量或活性，增加抗病性。

9.一种利用权利要求1所述从水稻中分离鉴定的提高水稻抗病性的基因等融合构建表达载体，其特征在于，所述表达载体为pC1300-Cas9，并通过农杆菌介导的基因转化法将CRISPR-Cas9载体转入水稻受体盐稻8号中。

10.一种权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用方法进一步包括：通过上调所述基因在植物中表达的蛋白表达量或活性，将体内SA转化成2，5-DHBA，进而获得SA含量降低的植物。