[发明专利]HOXC10在胃癌发病机制中的作用

说明书

一种在胃癌中高表达的潜在促癌基因(HOXC10)，能够促进胃癌细胞的侵袭和转移。发明了四对shRNA及重组慢病毒，可化学合成，具有沉默HOXC10表达效率高，对胃癌有潜在治疗作用。

技术领域

本文发明涉及基因表达在癌症发病机制中的作用，特别是涉及胃癌。

背景技术

胃癌(Gastric Cancer)是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，据统计，我国2015年胃癌新增发病人数大约68万人，病死人数大约50万，居恶性肿瘤第二位，其死亡率在男性中仅次于肺癌，在女性中仅次于乳腺癌。目前胃癌仍以手术治疗为首选。随着医疗技术水平的提高，内镜下早期诊断率较前明显提高并可及时进行相应治疗，但若发生肿瘤转移，往往导致手术难以进行而只能接受姑息治疗。同源盒(Homeobox) 基因是一个调节基因家族，编码有转录因子作用的特异性核蛋白(Homeoprotein，同源盒蛋白)。HOXC10 是HOX家族中的一员，HOXC10定位于人类染色体12q13.13，其同源决定簇负责识别并结合特异序列的 DNA基序，进而激活或抑制下游目的基因表达，控制器官发生与细胞分化。近年来，研究报道HOXC10 在骨肉瘤、乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、宫颈癌等肿瘤中可促进转移、抑制凋亡等。迄今，HOXC10在胃癌恶性发展中的生物学功能、分子机制及表观遗传学等研究仍较为缺乏。

发明内容

本发明发现了HOXC10在胃癌中表达增高，具有促进侵袭、转移的作用，并且发明了四对shRNA，可化学合成，具有沉默HOXC10表达效率高，对胃癌有潜在治疗作用。

具体实施方式

1.细胞株体外培养(Cell Culture)

1.1.相关试剂与仪器

1.1.1.试剂

DMEM、RPMI 1640、KSFM、胰酶、FBS、PBS。

1.1.2.培养相关仪器与耗材

生物安全柜、二氧化碳培养箱、倒置相差显微镜、细胞培养瓶、细胞培养皿、细胞培养板、冻存管、枪头。

1.2.方法

正常人胃粘膜细胞GES-1采用含10％FBS的KSFM培养液于37℃、5％CO₂的培养箱中进行培养；胃癌细胞株AGS、MKN28、NCI-N87、MGC803均采用含10％FBS的RPMI 1640培养液于37℃、5％CO₂的培养箱中进行培养；胃癌细胞株HGC27、MKN45、SGC7901均采用含10％FBS的DMEM培养液于37℃、5％CO₂的培养箱中进行培养。每天观察细胞形态变化，每隔1天进行细胞换液，待细胞密度达到85％-90％后，在生物安全柜中遵循无菌操作使用0.25％的胰酶进行细胞消化传代。

2.免疫印迹(Western Blotting；WB)

2.1.相关试剂与仪器

2.1.1.抗体

HOXC10、ATM、p-ATM、IκBα、p-IκBα、α-tubulin、鼠与兔二抗。

2.1.2.试剂与仪器

Glycine、Tris base、SDS、Methanol、RIPA缓冲液、Tween-20、脱脂奶粉、Glycerine、Gromophenol Blue、 DTT、甘氨酸、β-巯基乙醇、甲醇、ECL发光液、蛋白酶抑制剂PMSF、BCA Protein Assay kit、低温超速离心机(Eppendorf公司)、分光光度计(Eppendorf公司)、Thermomixer(Eppendorf公司)、SDS-PAGE 蛋白电泳仪(Bio-Rad公司)、垂直式电泳槽(Bio-Rad公司)、硝酸纤维素膜电转系统(Bio-Rad公司) 等。