[发明专利]HOXC10在胃癌发病机制中的作用

权利要求书

1.一种(共四个)重组慢病毒载体人源HOXC10沉默shRNA，将它们分别命名为HOXC10sh#1、HOXC10 sh#2、HOXC10 sh#3和HOXC10 sh#4。其干扰序列为：

HOXC10 sh#1：CCGGCGCTCTAAGAATCTGCTTGAACTCGAGTTCAAGCAGATTCTTAGAGCGTTTTT；

HOXC10 sh#2：CCGGCTGGAGATTAGCAAGACCATTCTCGAGAATGGTCTTGCTAATCTCCAGTTTTT；

HOXC10 sh#3：CCGGACCTCGGATAACGAAGCGAAACTCGAGTTTCGCTTCGTTATCCGAGGTTTTTT；

HOXC10 sh#4：CCGGACCTAGTGTCAAGGAGGAGAACTCGAGTTCTCCTCCTTGACACTAGGTTTTTT。

一种重组慢病毒载体人源HOXC10基因亚克隆。

酶切位点：SgfI/MluI

载体标签：C端融合FlagHis标签

测序引物：5’端测序引物(EF1a Seq_01)：GAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTG

3’端测序引物(R7)：CTTATTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCG

同源盒蛋白HOXC10在胃癌中促进侵袭、转移的作用

体外实验：

在AGS及SGC7901人胃癌细胞株中，HOXC10被shRNA稳定干扰后，wound healing实验显示，细胞划痕修复速度明显下降，transwell实验显示，细胞穿过小室的数目明显减少；而在HOXC10克隆稳定过表达后，wound healing实验显示，细胞划痕修复速度明显加快，transwell实验显示，细胞穿过小室的数目明显增多。同时我们发现HOXC10促进侵袭、转移时通过NF-κB通路发挥作用，沉默HOXC10后，其下游基因ATM表达无差异，而磷酸化p-ATM显著降低，NF-κB通路中p-IκBα表达显著升高，降解减少，与NF-κB-P65/P50结合，抑制其入核与DNA结合，从而抑制NF-κB信号通路。

体内试验：

将稳定干扰HOXC10表达重组慢病毒转染入人胃癌细胞株SGC7901后，注射进小鼠皮下，在3周后发现注射入稳定干扰HOXC10表达细胞株的小鼠皮下瘤体积及重量均显著低于注射对照组细胞株的小鼠。