[发明专利]一种降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法

说明书

本发明公开了一种降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，属于基因工程以及发酵工程技术领域。本发明提供了一种低产尿素和氨基甲酸乙酯的重组酿酒酵母S.cerevisiae Na^DUR1,2/DUR3‑Δcar1，此重组酿酒酵母以酿酒酵母Na为宿主，敲除编码精氨酸酶的基因CAR1，并且，高效表达编码脲基酰胺酶的基因DUR1,2和编码尿素转运蛋白的基因DUR3；使用此重组酿酒酵母生产得到黄酒发酵液中，尿素的含量低至3.0mg/L，分别较酿酒酵母Na和出发菌株S.cerevisiae Na^DUR1,2‑Δcar1降低了92.1％和43.4％。

技术领域

本发明涉及一种降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，属于基因工程以及发酵工程技术领域。

背景技术

氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate，EC)是一种潜在致癌物，可导致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病，被国际癌症研究机构(International agency for research oncancer，IARC)列为2A类致癌物质。

氨基甲酸乙酯广泛存在于腐乳、酱油等发酵食品及清酒、黄酒、葡萄酒、威士忌、白兰地等酒精饮品中。其中，酒精饮品是人体摄入氨基甲酸乙酯的主要来源，加拿大和捷克等国家纷纷对市场上各类酒精饮品中氨基甲酸乙酯的含量规定了限量标准。2012年，中国香港消费者委员会关于市售酒精饮品中氨基甲酸乙酯含量的调查结果显示，16种黄酒产品中均含有氨基甲酸乙酯，含量最高达到260μg/L，引起了黄酒生产企业和消费者的高度重视。

因此，急需找到一种降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法以提高黄酒的饮用安全性。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是提供一种降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法。

[技术方案]

为解决上述技术问题，本发明提供了一种重组酿酒酵母，所述重组酿酒酵母以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为宿主，敲除编码精氨酸酶的基因CAR1，并且，表达编码脲基酰胺酶的基因DUR1,2和编码尿素转运蛋白的基因DUR3。

在本发明的一种实施方式中，所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Na。

在本发明的一种实施方式中，所述编码精氨酸酶的基因CAR1的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

在本发明的一种实施方式中，所述编码脲基酰胺酶的基因DUR1,2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

在本发明的一种实施方式中，所述编码尿素转运蛋白的基因DUR3的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明还提供了一种降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，所述方法为以上述重组酿酒酵母作为酒母，将酿酒原料经浸米、蒸饭、冷却、拌曲后，将酒母接种到酿酒原料中，经前酵、后酵、过滤澄清，得到黄酒。

在本发明的一种实施方式中，所述方法包含如下步骤：

(1)浸米：取糯米，加水浸过米层进行浸泡，得到浸好的糯米；

(2)蒸煮：蒸煮浸好的糯米，至内无白心、颗粒均匀、软而不烂、熟而不黏，得到蒸熟的糯米；

(3)拌曲：将蒸熟的糯米冷却、摊凉后，添加生麦曲和熟麦曲摊拌均匀，得到拌好的糯米；

(4)前酵：将拌好的糯米与水和酒母混合后进行静置发酵，得到发酵物A；

(5)后酵：前酵结束后，将发酵物A继续静置发酵15d，得到发酵物B；