[发明专利]一种咖啡果小蠹的特异性SS-COI引物对、鉴定试剂盒和快速鉴定方法有效
| 申请号： | 202010920559.1 | 申请日： | 2020-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN111826450B | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 王政;孟倩倩;孙世伟;刘爱勤;苟亚峰;高圣风 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院香料饮料研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘颖 |
| 地址： | 571533 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 咖啡 果小蠹 特异性 ss coi 引物 鉴定 试剂盒 快速 方法 | ||
1.一种咖啡果小蠹的特异性SS-COI引物对，其特征在于，由SEQ ID NO：1所示的上游引物和SEQ ID NO：2所示的下游引物组成。
2.权利要求1所述的特异性SS-COI引物对在制备鉴定咖啡果小蠹的试剂盒中的应用。
3.一种鉴定咖啡果小蠹的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的特异性SS-COI引物对、TaqPCRMasterMixⅡ和ddH2O。
4.一种快速鉴定咖啡果小蠹的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待测样品的DNA；
(2)以所述待测样品的DNA为模板，采用权利要求3所述的试剂盒对DNA模板进行扩增；
(3)根据步骤(2)中扩增的结果判定所述待测样品中DNA模板是否来源于咖啡果小蠹；
若扩增出453bp的序列片段，则DNA模板来源于咖啡果小蠹；
若未扩增出453bp的序列片段，则DNA模板来源于其它物种。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述扩增的体系如下：
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述扩增的体系如下：
7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述DNA模板的浓度不小于203pg/μL。
8.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述上游引物或所述下游引物在扩增体系中的浓度为0.04～0.4pmol/μL。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述扩增的程序为：93～95℃预变性3.0～5.0min；93～95℃变性25～35s，56～60℃退火30～50s，72℃延伸40～60s，30～40个循环；72℃延伸5～10min。
10.根据权利要求4或9所述的方法，其特征在于，所述扩增的程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，57℃退火50s，72℃延伸1min，40个循环；72℃延伸10min。
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