[发明专利]严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备、纯化和鉴定方法

权利要求书

1.严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)、将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体，将SARS-CoV-2的M、S、E基因进行密码子优化，然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后，将E基因构建至pP10启动子后，获得表达EMS重组质粒；所述将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体是依次在pFastBacDual载体多克隆位点MCS2后，插入pPH启动子、多克隆位点MCS3及SV40 polyA尾，改造成三表达载体；

所述多克隆位点MCS2包含BamHI、RsrII、BssHII、EcoRI酶切位点，多克隆位点MCS3包含酶切位点NdeI、HindIII酶切位点；

所述多克隆位点MCS2的核苷酸序列为：GGATCCCGGTCCGAAGCGCGCGGAATTC；所述MCS3的核苷酸序列为：CATATGAAGCTT；

(2)将EMS重组质粒转化至DH10 Bac^TM大肠杆菌中，经蓝白筛选挑取白色阳性克隆，提取杆粒转染ExpiSf9^TM细胞，胞内共表达E、M、S结构蛋白，自组装形成病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述密码子优化后的SARS-CoV-2E基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID NO.4。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述密码子优化后的SARS-CoV-2M基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID NO.5。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述密码子优化后的SARS-CoV-2S基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID NO.6。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将EMS重组质粒先转化入Top10感受态细胞，重新提取重组质粒后转化至DH10 Bac^TM大肠杆菌感受态细胞。